諾博萊德 小量全血基因組DNA快速提qu試劑he核酸提取

FlashPure Blood Genomic DNA Kit血液基因組DNA提qu試劑he（離心柱型）

目錄號(hào):40011

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

無水乙醇，RNase A（可選）

保存條件：

室溫（15~25℃）

蛋白酶K，室溫可保存6個(gè)月，4℃保存12個(gè)月，~20℃保存2年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

適用于從新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA，也可以提取白膜層和血凝塊。

本試劑盒采用獨(dú)te的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：  

1.  簡(jiǎn)便快速：30min內(nèi)可獲得高純度的基因組DNA。

2. 安全無毒：無需ben酚/氯仿抽提。

3. 高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量200µl全血可提取出3～6µg基因組DNA，

4.高純：OD260/280=1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)30～50kb，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)：

1. 如果結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 為了最佳效guo，最好使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

4. 不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。

5. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但是EDTA可能下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋

操作步驟：

第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入100μl平衡液，

12,000rpm離心1min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）

2. 取200μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入1.5ml離心管。

▲如果血液起始量小于200μl，則用1×PBS補(bǔ)足到200μl。

如果起始量介于200μl-300μl之間，則需要按照比例增加試劑用量。如果起始量介于300μl~1 ml之間，則需要先進(jìn)行紅細(xì)胞裂解操作:將10x紅細(xì)胞裂解液用滅菌水稀釋到1x，然后在樣品中加入3倍體積的1x紅細(xì)胞裂解液，顛倒混勻，室溫放置10 min，期間再顛倒混勻幾次。13,000rpm離心20sec(對(duì)于1.5ml離心管)2,000~3,000rpm離心5min(對(duì)于15ml離心管)，吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀（如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，則再次加入3倍1x紅細(xì)胞裂解液，重復(fù)裂解一次），加入200μl1×PBS，振蕩至徹di懸浮。

▲提取凝固血時(shí)需要在操作前用槍頭搗碎血凝塊后按照正常步驟進(jìn)行。

▲如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量?jī)H用5~20μl，可加1×PBS補(bǔ)足到200μl后，進(jìn)行下面的裂解步驟。

3. （可選，一般不需要）如果需要去除RNA，可向200μl 的血液樣品中加入5μlRNaseA(100mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5~10min。

4. 加入20μl蛋白酶K溶液，充分振蕩混勻。

5. 加入200μl結(jié)合液CB，充分振蕩混勻，70℃放置10 min，期間顛倒混勻幾次，溶液應(yīng)該變清亮，但顏色偏黑。（如果未變清亮，請(qǐng)延長(zhǎng)時(shí)間）

6. 冷卻后加100μl無水乙醇(或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

7. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè)DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）

13,000rpm離心1min，DNA被吸附在膜上，倒棄濾液。

8.加入500μl抑制物去除液IR，13,00rpm離心30sec，倒棄濾液。

9. 加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。

10. 重復(fù)步驟9一遍。

11. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm離心2 min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

12.取出DNA吸附柱，放入一個(gè)干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量），室溫放置3~5min，13, 000rpm離心1min。

▲可將第一次洗脫所得的DNA溶液重新加入離心柱中，室溫放置 2 min，13,000rpm離心1min?？梢蕴岣邼舛?0%左右。

13. DNA可以存放在2~8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃。

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