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Fc Receptor

流式細胞術通過熒光標記抗體特異性的識別細胞或細胞亞群，從而在流式細胞儀中進行檢測和區(qū)分。標記抗體的Fab段進行特異性識別，但所有抗體中高度保守區(qū)Fc段也會被部分細胞識別，識別免疫球蛋白（Ig）Fc段的蛋白即為Fc受體（Fc Receptor）。

Fc受體存在于多種免疫細胞的表面，包括單核細胞、巨噬細胞和DC細胞、嗜酸性粒細胞，嗜堿性粒細胞、中性粒細胞、髓系細胞、B細胞表面、NK細胞等等，在免疫細胞表面發(fā)揮多種關鍵功能：

吞噬作用：免疫細胞如巨噬細胞和中性粒細胞通過Fc受體識別并吞噬被抗體包被的微生物，這是一種重要的先天免疫防御機制。

溶酶體降解：吞噬后的免疫復合物被運輸?shù)饺苊阁w內(nèi)，溶酶體中的酶類能夠降解病原體和其他異物，完成病原體的清除過程。

細胞毒作用：自然殺傷細胞等通過Fc受體識別被抗體標記的細胞，釋放細胞毒性顆粒。

細胞因子和趨化因子的分泌：激活的免疫細胞能夠分泌細胞因子和趨化因子，有助于調(diào)節(jié)免疫反應，吸引其他免疫細胞到感染或炎癥部位。

圖1 免疫細胞表面FC受體的功能

FcR根據(jù)它們結(jié)合的免疫球蛋白類型被分為不同的類別：IgG的Fc受體（FcγR）、IgE的Fc受體（FcεR、IgA的Fc受體（FcαR）、IgM的Fc受體（FcμR）和IgD的Fc受體（FcδR）。

日常實驗中使用的多是IgG類型的單抗，其Fc受體（FcγR）根據(jù)親和力強弱可分為三個亞家族：FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）。

圖2 FcγR 家族和表達模式

FcR阻斷

在流式實驗中細胞表面表達的多種FcγR易與抗體FC段結(jié)合，出而出現(xiàn)非特異性染色，導致分析中容易出現(xiàn)高背景或甚至假陽性信號。為獲得正確的陽性細胞群，可以先加入封閉試劑孵育細胞，占據(jù)結(jié)合位點阻斷Fc受體與抗體結(jié)合，降低檢測背景獲得更準確的結(jié)果。

常見的封閉試劑主要有以下幾種：

血清或血清隨純化的IgG

抗CD16/32抗體

抗CD16/32抗體

S-RMab®FcR阻斷劑

斯達特上新Human FcR Blocking Reagent，親和力強，聯(lián)同已上新的Mouse Fc Receptor Blocker，提供FcR阻斷產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：Human FcR Blocking Reagent           貨號：S0F0002           阻斷用量：1.0μg per 2.5x10^5 cells in 100ul volume

流式分析人PBMC標記兔單克隆IgG同型對照抗體，孵育30分鐘后在冰上PBS（右側(cè)）與Human FcR Blocking Reagent按1/100（1 µg，2.5×10^5細胞在100 µL中）稀釋度處理以阻斷Fc受體及非特異性蛋白結(jié)合，并與未標記對照組（未與一抗和二抗孵育的細胞）（藍色）進行比較。

流式細胞術分析THP-1細胞標記兔單克隆IgG同型對照抗體，在冰上PBS（黑色）或人類FcR阻斷試劑按1/100稀釋度（1 µg，2.5×10^5細胞在100 µL中）（紅色）孵育30分鐘處理，以阻斷Fc受體及非特異性蛋白結(jié)合，并與未標記對照組（未與一抗和二抗孵育的細胞）（藍色）進行比較。