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水質細菌檢驗箱使用方法

閱讀：1954        發(fā)布時間：2015-3-16

 

水質細菌檢驗箱整套裝置由采樣檢驗箱和選購部分-微型培養(yǎng)箱組成?？稍谝巴饣颥F(xiàn)場進行采樣和檢驗，微型培養(yǎng)箱采用交、直流兩用電源可在沒有交流電條件下使用。

采樣檢驗箱使用方法

1、  細菌中數(shù)檢驗方法

1. 1試驗準備：

1.1. 1水樣采集：采水容器事先滅菌或使用前用被檢水反復沖洗數(shù)次，然后采水。1.1.2移液管吸嘴的消毒：取下套在酒精燈上的支架，把支架小口端安裝在酒精燈口上， 杯放在支架上，倒入適量水，把吸嘴放入 杯內，煮沸5-10分鐘，備用。

1.2. 肉湯營養(yǎng)紙墊制備：

1.3. 1將小皿用酒精棉球擦拭消毒，晾干后每皿加一片紙墊。

1.2.2取肉湯安瓶一支倒人小杯內，加入15mi蒸餾水或自來水煮沸溶解即為營養(yǎng)肉湯。必要時?？梢灾苯佑瞄_水沖泡溶解。

1.2.3取盛有紙墊小皿，每皿紙墊加營養(yǎng)肉湯1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜），即為肉湯營養(yǎng)墊，備用。

1.3檢驗水樣：

1.3. 1細菌過濾器系統(tǒng)的組裝；從檢驗箱中取出過濾器，將濾床 板端插入檢驗箱前側箱壁與塑料板之間的夾縫內，把三通管帶細塑料管一端插入濾器下面的孔內，三通管大孔端插入20ml注射器頭下，接頭處要嚴密。備用。

1.3.2細菌過濾器的處理：用燃著的酒精棉球擦拭細菌過濾器的濾床和漏斗，待涼后，取一片濾膜，放在濾床上，裝上漏斗并擰緊。

1.3.3過濾水樣：生活飲用水為1ml，平分兩份，水源水可同時做原水1ml和稀釋50倍（箱內50ml小瓶放入1ml被檢水源水，家50ml冷開水或無菌水）1ml兩個稀釋度，水樣加到濾器中后使之全部覆蓋膜面，然后抽濾至水干，將阻菌濾膜面朝上貼于肉湯營養(yǎng)墊上。注意膜與營養(yǎng)墊之間不要有氣泡。

1.4培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。

1.5菌落計數(shù)：計數(shù)膜上所有菌落數(shù)。

   細菌總數(shù)計數(shù)方法：

   細菌總數(shù)（個/ml）=膜上的平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)

1. 6注意事項：

1.6.1 檢驗細菌總數(shù)過程中應盡量做到無菌操作。

1.6.2 每檢驗完一個水樣應用燃著的酒精棉球燒灼漏斗和濾床后，再進行檢驗第二個樣品。

1.6.3 每次試驗完畢，必須用干紗布把過濾漏斗和濾床等處擦干，以免腐蝕漏斗。

2、  大腸菌群檢驗方法：

 2.1 試驗準備： 同細菌總數(shù)檢驗方法（1.1）

 2.2 遠藤營養(yǎng)墊的制備：

  2.2.1 將小皿用酒精棉球擦拭消毒、晾干。每皿內加一片紙墊。

  2.2.2 取遠藤培養(yǎng)基安瓶一支，倒人小杯內，從酒精棉球瓶內取出棉球擠壓1-2滴酒精于培養(yǎng)基上使其剛好濕透，用玻棒攪勻，然后加15ml冷開水或蒸餾水，搖勻溶解即為遠藤營養(yǎng)墊。

  2.2.3 取盛有紙墊培養(yǎng)皿，每皿紙墊加遠藤培養(yǎng)液1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜），即為遠藤營養(yǎng)墊。

 2.3 檢驗水樣：

  2.3.1 細菌過濾器系統(tǒng)的組裝： 同細菌總數(shù)（1.3.1） 

  2.3.2 細菌過濾器系統(tǒng)的處理： 同細菌總數(shù)（1.3.2）

  2.3.3 過濾水樣：生活飲用水，應檢100-330ml，將被檢水樣倒入漏斗內至上刻度線處（100ml），檢驗330ml水量時，可過濾100ml后，再加100ml，直至濾完330ml，（如遇不易過濾水，可分2-3張膜過濾，分別貼于2-3個遠藤應營養(yǎng)紙墊上，結果將膜上菌落數(shù)相加計算），將膜取下，小心貼于備用的遠藤營養(yǎng)紙墊上。此時應注意勿使濾膜與營養(yǎng)墊之間留有氣泡；檢驗未處理的水源水，取1ml水眼個，方法：同細菌總數(shù)，不同處僅把阻菌膜貼于遠藤營養(yǎng)墊上。

2.4 培養(yǎng)：37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18-24小時。

2.5 菌落計算： 計數(shù)膜上帶有金屬光澤或深黑色菌落。即為大腸菌數(shù)。

        大腸菌群數(shù)計算方法：

                             

大腸菌群數(shù)（個/升）=   膜上菌落數(shù)*稀釋倍數(shù) *1000

                       被檢水樣體積(ml)

    2.6注意事項：同一水樣，同時檢驗細菌總數(shù)和大腸菌群時，可不處理濾器；其它項同細菌總數(shù)(1.6)

    3\水中腸道致病菌（沙門氏菌屬和志賀氏菌屬）檢驗方法：

     3.1 快速檢驗法：

      3.1.1增菌培養(yǎng)：

       3.1.1.1 直接增菌法：吸取待檢水樣10ml放入增菌瓶中，加入一小管（0.44g）沙門氏菌—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基，充分振搖攪拌使其溶解。然后置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。

       3.1.1.2濃縮增菌法：吸取待檢水樣100ml（更大或更小體積的水樣，視水質而定）通過濾膜過濾，然后將阻菌濾膜取下，放入含有一小管（0.44g）沙門氏—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基的10ml增菌液中（可用被檢水或無菌蒸餾水配制增菌液）置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24小時。

      3.1.2 協(xié)同凝集試驗：具體步驟見“協(xié)同凝集試驗方法”。不同種類的抗原液（即不同種類的沙門氏菌、志賀氏菌增菌后的菌懸液）分別用對應的凝集試劑進行協(xié)同凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

      3.1.3 協(xié)同凝集試驗方法：

       3.1.3.1 取0.5ml生理鹽水將協(xié)同凝集試劑溶解，用手搖勻。

       3.1.3.2 取1滴凝集試劑于載玻片上，加一滴抗原液（經增菌液培養(yǎng)24小時的水樣），充份混勻，1-3分鐘內觀察結果。

       3.1.3.3 結果判斷標準：

          懸液*透明，出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為++++

          透明度稍差，出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為+++

          懸液半透明，凝塊和顆粒較少為++

          懸液不透明，有少量顆粒為+

          懸液渾濁，無顆粒出現(xiàn)為—

          ++以上為陽性，+為可疑。

          對照：標準抗原作陽性對照

          生理鹽水作陰性對照

      3.1.3.4 注意：協(xié)同凝集試劑應置低溫冷凍保存，有效期3年。

     3.2 常規(guī)檢驗方法：

      3.2.1 增菌培養(yǎng)：快速檢驗法中的直接增菌法和濃縮增菌法相同，其中志賀氏菌的增菌時間可以為16-18小時。

      3.2.2 平板分離：取上述經增菌的沙門氏菌、志賀氏菌培養(yǎng)液，用接種環(huán)化線接種改良SS選擇瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。（如使用其它選擇培養(yǎng)基時，請注意對宋內氏痢疾桿菌是否良好，還是不生長或生長很差）。

      3.2..3 挑選菌落接種雙糖管：每個平板挑取5個以上可疑腸道病原菌菌落，接種于雙糖鐵或三糖鐵試管培養(yǎng)基中（將克氏雙糖鐵干燥培養(yǎng)基加水煮沸溶解后分裝于塑帽試管中，3ml，高壓蒸汽滅菌或水浴100℃15分鐘后放成高層斜面，凝固后即成）。置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時。

        附：沙門氏菌屬和志賀菌屬在改良SS選擇瓊脂平板上的菌落特征：

        沙門氏菌屬，菌落呈無色透明或半透明或中間有黑心，直徑為1-3毫米（培養(yǎng)時間長時，有的菌落中心略呈微粉色，但與紅色的大腸菌菌落*不同）。

        志賀氏菌屬，菌落呈無色透明或半透明（宋氏痢疾桿菌的菌落中心有時略呈淺色），直徑1-3毫米。

       3.2..4 生化反應及血清學檢驗：

           沙門氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上，底層變黃（分解葡萄糖產酸），產氣或不產氣（如傷寒沙門氏菌不產氣），一般產H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用沙門氏菌多價血清或單價抗血清進行凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

           志賀氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上，底層變黃（分解葡萄糖產酸），不產氣，無動力，不產H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用志賀氏菌多價血清或單價血清進行凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

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