研域教您如何選擇二級試劑

   常見實驗中，各實驗標本測試免疫化學技術能否成功檢驗，取決于我們購買試劑時所選的試劑是否為特異性好的二級試劑，二級試劑用于鑒定免疫染色和免疫印跡中未標記的*抗體的位置。以下根據(jù)我司研究人員總結實驗方法，選擇*二級試劑時主要應考慮4個方面的因素：①與抗體相互作用的特異性； ②商業(yè)來源試劑的滴度；③檢測試劑的靈敏度；④二級試劑所產生的背景。

 
 一、特異性

   影響選擇二級試劑的zui后一個因素是其識別*抗體的特異性。如果需要在含有其他競爭性的蛋白中識別*抗體時，測定交叉反應極為重要。zui常見的情況是免疫染色樣本中含有來自宿主器官的抗體，或是雙抗體標記的熒光試驗

二、商業(yè)來源試劑的滴度

   分析不同廠商的產品需考慮的一個重要因素是使用該試劑的有效滴度，例如1mg標記抗體的成本在不同的廠家差異很大。某些商業(yè)化抗體，雖然其單位重量成本較高，但一般可作10倍稀釋后使用，故此類試劑更具有應用價值。

   此外，使用較高稀釋倍數(shù)的二級試劑可產生更清晰的背景。因此，應選擇能在較低滴度使用的二級試劑。所有的稀釋一定要使用含蛋白的緩沖液，例如含3％BSA的PBS，低濃度蛋白有變性的傾向，增加了非特異性相互作用的可能性，抵消了高倍稀釋的優(yōu)勢。

 
三、商業(yè)來源試劑的靈敏度

   二級試劑的靈敏度取決于兩方面的因素，即選擇適當?shù)臉擞浳锛笆煜さ呐悸?lián)技術。應通過比較不同的商業(yè)貨源測試第二試劑標記的偶聯(lián)效果。
    
   從不同的公司購買數(shù)批有效的二級試劑，并在相同的實驗室條件下做對比試驗，此類試驗應該穩(wěn)定可靠，容易重復。盡量從不同的公司選擇合適的供應批次，通過鑒定證實一批好試劑后，應根據(jù)需要購買，并留少量樣品作為下次試驗的標準。一旦選定較好的批號，應與廠商保持。

 
四、二級試劑產生的背景

   在任何試驗中由二級試劑引起的背景問題可以設立不加*抗體的對照評估。*的二級試劑在無*抗體存在時應不產生可檢測的信號。實際上，很少能獲得這種理想的結果，但一個良好的二級試劑本身所產生的背景應當相當?shù)汀?/p>

   長期存放的二級試劑常發(fā)生凝聚或變性，所以連續(xù)監(jiān)測背景就顯得特別重要，這不僅在評價有效的商用二級試劑時極為重要，在實驗中也應作為常規(guī)要求。這對細胞和組織免疫染色特別適合，因此在每一次試驗中，應將不加*抗體作為對照。

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