問(wèn)題

原因

解決方案

邊緣效應(yīng)

組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中

APES/多聚賴(lài)氨酸處理玻片；組織切片盡量薄；盡量避免選用壞死較多的組織

試劑未充分覆蓋組織

滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

非特異性染色體

抗體質(zhì)量問(wèn)題

使用質(zhì)量有保證的抗體

抗體孵育時(shí)間長(zhǎng)

減少孵育時(shí)間

抗體濃度過(guò)高

降低抗體濃度

一抗為多抗

使用單克隆抗體

內(nèi)源性過(guò)氧化物酶及生物素

延長(zhǎng)滅活時(shí)間

封閉不足

延長(zhǎng)封閉時(shí)間

DAB孵育時(shí)間過(guò)久或濃度過(guò)高

按說(shuō)明書(shū)配置試劑，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間

抗體孵育后洗滌不充分

每次孵育之后洗3*5次

滴加試劑時(shí)干片

及時(shí)滴加試劑

切片在緩沖液中浸泡過(guò)久

抗原修復(fù)之后及時(shí)封閉加一抗，不能過(guò)夜

陰性結(jié)果

抗體濃度及質(zhì)量

選擇有質(zhì)量保證的抗體，先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索抗體使用濃度

抗原修復(fù)不全

摸索合適的抗原修復(fù)方式及修復(fù)時(shí)間

抗原豐度

正常陰性

封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

減少封閉時(shí)間

DAB孵育時(shí)間短

鏡下控制顯色時(shí)間

細(xì)胞通透不全，抗體未能進(jìn)入細(xì)胞反應(yīng)

選擇合適的通透劑及其反應(yīng)時(shí)間

一抗二抗不匹配

選擇正確來(lái)源的二抗

脫片

玻片未處理好

玻片清洗干凈后用APES或多聚賴(lài)氨酸處理

切片厚薄不均勻

更換刀片；調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

烤片時(shí)間或溫度不夠

60攝食度2小時(shí)

組織自身問(wèn)題

腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片

抗原修復(fù)時(shí)溫度迅速變化

抗原修復(fù)后讓其自然冷卻

操作時(shí)用力過(guò)猛

有脫片嫌疑的切片不要用力甩，用吸水紙吸干殘余液體

染色弱

抗體濃度低，孵育時(shí)間短

提高抗體濃度，延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間

試劑使用超過(guò)有效期

試劑定時(shí)更新

滴加試劑時(shí)殘余緩沖液過(guò)多使試劑稀釋

滴加試劑前盡量減少殘余液體

封閉過(guò)度

減少封閉時(shí)間

著色不均勻

切片厚度不一致

更換刀片；調(diào)整好切片機(jī)狀態(tài)

試劑配制未混勻使局部濃度不一致

試劑充分混勻后滴加

試劑未*覆蓋組織

滴加試劑時(shí)讓試劑*覆蓋組織

脫蠟不*

更換脫蠟劑或延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間