SK-OV-3-GFP人卵巢癌綠色標(biāo)記細(xì)胞 培養(yǎng)步驟

培養(yǎng)常見問題及其解決

1.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？

培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個好的開始。

2.MCF-7+LUC人乳腺癌細(xì)胞（熒光素酶）何時須更換培養(yǎng)基？

視細(xì)胞生長密度而定， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無法存活。

4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。

5.何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6.培養(yǎng)MCF-7+LUC人乳腺癌細(xì)胞（熒光素酶）時應(yīng)使用5% 或10% CO2？或根本沒有影響？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO3 2-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時， 則應(yīng)使用5% CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別？

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收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理：

   您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多，但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導(dǎo)致對細(xì)胞處理不當(dāng)，或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。

       1.收到細(xì)胞，di一時間要鏡檢：觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細(xì)胞密度，有疑議及時咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點(diǎn)不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細(xì)胞聚集在一起，但是細(xì)胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。

       2.當(dāng)通過上一步的觀察，細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時，進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下，會調(diào)整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài)，在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細(xì)胞的存活率。

       3.如果經(jīng)di一步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%，并且細(xì)胞狀態(tài)很好時，則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細(xì)胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細(xì)胞類型，一次少傳些，保證每瓶細(xì)胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞，di一次處理也可以依照第二種情況。
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2 g/L)中比在Hanks (0.35 g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。