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土壤脲酶檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和*氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。
利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：甲苯10ml×1瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：粉劑×1瓶，臨用前加入20ml蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；
試劑三：液體65ml×1瓶，4℃保存；
試劑四A液：液體1ml×1瓶，4℃保存；試劑四B液：液體4ml×1瓶，4℃保存；臨用前將A液倒入B液中混合，待用；4℃保存一周
試劑五：液體5ml×1瓶，4℃保存；
操作步驟：
- 培養(yǎng)
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.25 | 0.25 |
試劑一（μl） | 125 | 125 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，室溫放置15min | ||
試劑二（μl） | 625 |
|
蒸餾水（μl） |
| 625 |
試劑三（μl） | 1250 | 1250 |
混勻，放入37℃水浴培養(yǎng)24h后，10000g常溫離心10min，取上清液。 | ||
- 將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10倍（取0.1ml上清液，加入0.9ml蒸餾水）。
3、測(cè)氨量
| 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
稀釋后的上清液（μl） | 400 | 400 |
試劑四（μl） | 80 | 80 |
試劑五（μl） | 60 | 60 |
充分混勻，室溫放置20min | ||
蒸餾水（μl） | 460 | 460 |
混勻，578nm處蒸餾水調(diào)零，測(cè)A值，ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
脲酶活力的計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0915x+0.0373；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μgNH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
脲酶活力（U/g 土樣）＝(ΔA-0.0373)÷0.0915×10×V反總÷W÷T=874×(ΔA-0.0373)
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；V反總：反應(yīng)體系總體積：2ml；W：樣本質(zhì)量，0.25g。
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