PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-糖苷酶

PNGase F從糖蛋白上裂解N-連接（天冬酰胺連接）的寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，使寡糖保持完整。PNGase F不會(huì)去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有Alpha-（1,3）連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請(qǐng)使用肽N-糖苷酶A。

變性增加了切割速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍可以*被N-去糖基化，但是孵育時(shí)間可能需要增加。該酶在反應(yīng)條件（37°C）下將保持*活性至少96小時(shí)。

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，尤其是Endo F家族的酶和EndoH。這些酶在寡糖核心的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基之間裂解，生成截短的糖分子上具有一個(gè)N-乙酰氨基葡糖殘基殘留在天冬酰胺上。這樣可以提高溶解度，將蛋白質(zhì)保留在溶液中，然后用PNGase F進(jìn)行糖基去糖基化處理后沉淀出來(lái)，這樣就可以完整清除寡糖。遠(yuǎn)藤F1裂解高甘露糖和一些雜合型N聚糖。Endo F2將消除雙天線和高甘露糖（降低40倍的速率）。內(nèi)三醇和巖藻糖基化雙觸角N-聚糖的Endo F3釋放。遠(yuǎn)藤H 去除雜質(zhì)和高甘露糖聚糖。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（曾是Meningosepticum的Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 PDB 1PGS UniProt Q9XBM8

pH 7.5的20 mM Tris-HCl中的PNGase F含量

包括20 µL和60 µL的包裝大?。?/font>
5倍反應(yīng)緩沖液7.5 – 250 mM磷酸鈉，pH 7.5
變性溶液– 2％SDS，1 M Beta-巰基乙醇
Triton X-100 – 15％溶液

比活度> 25 U / mg

活性5 U / ml

分子量35,000道爾頓

pH范圍6-10，最佳7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入200 µg糖蛋白。用去離子水將最終體積調(diào)整為35 µl。
2.加入10 µl 5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5 µl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
3.酷。加入2.5 µl Triton X-100并混合。
4.向反應(yīng)中添加2.0 µl酶。在37°C下孵育3小時(shí)。

特異性裂解所有天冬酰胺連接的復(fù)合，雜合或高甘露糖寡糖，除非巖藻糖基化了α（1-3）核心；否則將其切掉。天冬酰胺必須在兩個(gè)末端均肽鍵結(jié)合，無(wú)Endo F

比活性定義為在37°C，pH 7.5下1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性RNase B中釋放N-連接寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲(chǔ)存將酶儲(chǔ)存在4°C。