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1、蛋白截留不住?蛋白損失嚴(yán)重?該怎么選擇選對截留分子量?
您是否苦于超濾管流速慢呢?很有可能是截留分子量選小了。
截留分子量是根據(jù)已知分子量（以道爾頓為單位）的溶質(zhì)保持>90%的能力而給出的額定值。對于蛋白質(zhì)，建議選擇的截留分子量是需要截留的溶質(zhì)分子質(zhì)量的1/6-1/3。如果首先考慮流速的因素，則選擇需要截留的溶質(zhì)分子質(zhì)量的1/3作為膜的截留分子量；如果截留效果作為主要考慮，則選擇需要截留的溶質(zhì)分子質(zhì)量的1/6作為膜的截留分子量。另外，由于不同系列產(chǎn)品的工藝不一樣，更換產(chǎn)品系列時，適合的截留分子量有時候是會變化的。
2、濃縮后我發(fā)現(xiàn)濃縮液中沒有目的蛋白，可能的原因是?
首先，超濾管的低起始蛋白濃度為01mg/ml.請確保您的樣本的起始濃度大于這個濃度。其次，如果問題仍然出現(xiàn)。請不要丟棄您的樣本濾過液，以做下一步分析：
1)如果您的樣本在濾過液中，那么請排查：
a)您是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3）?
b)使用的離心力是否是在最高范圍內(nèi)?如果您使用的是rpm，請換算成相應(yīng)的g離心
c)離心機(jī)最近是否有校準(zhǔn)過?
d）您是否嘗試這個蛋白?如果能確保您用同樣的超濾管對其他蛋白成功操作的話，那么有可能是您的目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構(gòu)象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管(如原本選用30K，此時可以選擇10K)。
2)如果您的樣本也不在濾過液中：
a)您的樣本起始蛋白濃度是否大于0.1mg/ml?
b)您用來確定樣本濃度的方法是什么?是否可信?
c)您的目的蛋白是不是沉淀了?如果是，具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀的方法。
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