一、實驗方法

1.  小鼠胸腺細胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過篩，放入試管，離心1 000 rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank’s液中，配成1×107/ml細胞懸液。
 

2.  取試管3支，標明順序，依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液，放入37℃水浴30分鐘。

3.  取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴，混勻，室溫放置2分鐘。

4.  重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀察，再用高倍鏡觀察，比較3管中細胞死活情況。

二、實驗結果

死細胞呈紅色，無光澤且腫脹變大；活細胞不著色、有光澤且形態(tài)正常。

高倍鏡下計數(shù)200個細胞并計算其中死細胞的百分數(shù)。計算公式如下：死細胞百分數(shù)= EQ EQ \F(實驗管死細胞數(shù)%-對照管死細胞數(shù)%，100%-對照管死細胞數(shù)%)

1.  胸腺細胞制備速度要快，且需在冰浴中進行操作，以保持細胞活力；

2.  抗Thy-1的單克隆抗體和補體的效價要在預實驗中確定；

3.  細胞對照管死細胞數(shù)若超過5%，實驗需重新做；

4.  細胞滴加到載玻片上后長時間放置不檢測也可導致假陽性反應。

一、實驗材料

1.  解剖器械(眼科剪、眼科鑷)、平皿、80～100目不銹鋼網(wǎng)；

2.  試管、1 ml吸量管、尖吸管；

3.  載玻片、蓋玻片；

4.  C57BL/6J小鼠；

5.  含5%NBS的冷Hank’s液；

6.  抗小鼠Thy-1的單克隆抗體（最適稀釋度，本室制備）；

7.  補體(豚鼠新鮮血清并經(jīng)小鼠胸腺細胞吸收，預先測定效價并稀釋為最佳稀釋度)；

8.  1%伊紅-Y染液。

二、多重PCR的特點

1.高效性

在同一PCR反應管內(nèi)同時檢出多種病原微生物，或?qū)τ卸鄠€型別的目的基因進行分型，特別是用一滴血就可檢測多種病原體。

2.系統(tǒng)性

多重PCR很適宜于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌，戰(zhàn)傷感染細菌及細菌戰(zhàn)劑的同時偵檢。

3.經(jīng)濟簡便性

多種病原體在同一反應管內(nèi)同時檢出，將大大的節(jié)省時間，節(jié)省試劑，節(jié)約經(jīng)費開支，為臨床提供更多更準確的診斷信息。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產(chǎn)品資訊。

 

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。