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DNA是遺傳信息的載體，是最重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象。所以基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)最基本實(shí)驗(yàn)之一。 今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時(shí)間了還會(huì)介紹動(dòng)物基因組DNA的提取步驟。
DNA. RNA和核苷酸都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，它們的鈉鹽比游離酸易溶于水，RNA鈉鹽在水中溶解度可達(dá)40g/L. DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。
在酸性溶液中，DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細(xì)胞核中。要從細(xì)胞中提取DNA時(shí)，先把DNP抽提出來,再把P除去，再除去細(xì)胞中的糖，RNA及無機(jī)離子等，從中分離DNA。DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受 鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中，幾乎不溶解，如在0.14 mol/L的氣化鈉溶解度低，僅為在水中溶解度的1%，隨著鹽濃度的增加溶解度也增加，至1molL氯化鈉中的溶解度很大,比純水高2倍。RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小，在0.14mo/ 氯化鈉中溶解度較大。因此，在提取時(shí)，常用此法分離這兩種核蛋白。
苯酚氨仿作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復(fù)操作，再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài)，真核細(xì)胞DNA的分離通常是在EDTA及SDS-類去污劑存在下，用蛋白酶K消化細(xì)胞獲得。
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