一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

乙醛脫氫酶（ALDH，EC  1.2.1.10）是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。

本公司提供一種簡(jiǎn)單，快速，可靠的定量 ALDH 酶活性的方法。在這個(gè)測(cè)定中，乙醛被 ALDH 氧化產(chǎn)生 NADH，然后將無色探針還原成有色產(chǎn)物，在 450nm 處具有強(qiáng)吸光度， 即可得到乙醛脫氫酶（ALDH）酶活性大小。

二、試劑盒的組成和配制：

三、所需的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、96 孔板、可調(diào)式移液器、研缽、天平、離心機(jī)、蒸餾水。

四、乙醛脫氫酶（ALDH）酶活測(cè)定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備：

① 組織樣本

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm，4℃離心 10min， 取上清置冰上待測(cè)。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 液體樣本：直接檢測(cè)。若渾濁，離心后取上清檢測(cè)。

2、上機(jī)檢測(cè)：

① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 450nm。

② 依次在 96 孔板中加入：

【注】若△A 值在零附近徘徊，可加大樣本量（如：40µL，則試劑三相應(yīng)減少），或者延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 T，則改變后的樣本體積 V1 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。

五、結(jié)果計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0364x - 0.0069；x 是 NADH 摩爾質(zhì)量（nmol），y 是ΔA。

2、按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化生成 1nmol NADH 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0099）÷0.1031]÷(Cpr×V1÷V) ÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）÷Cpr

3、按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每克樣品每分鐘催化生成 1nmol NADH 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=[（ΔA+0.0099）÷0.1031] ÷(W×V1÷V) ÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）÷W

4、按液體體積計(jì)算

酶活定義：每毫升液體樣本每分鐘催化生成 1nmol NADH 的酶量為 1 個(gè)酶活單位。

ALDH 酶活（nmol/min/mL）= [（ΔA+0.0099）÷0.1031] ÷V1÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）

V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.02 mL； T----反應(yīng)時(shí)間，30 min； W 樣本質(zhì)量，g；

Cpr 樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒。