PriCells –正常大鼠原代主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)

一、實(shí)驗(yàn)試劑

1、培養(yǎng)基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement

2、凍存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO

3、洗滌液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S

4、染色液： 0.4% Trypan Blue

5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit

6、檢測(cè)試劑：肌動(dòng)蛋白、a-SMA或Desmin抗體，熒光標(biāo)記二抗，4%多聚甲醛

二、實(shí)驗(yàn)器械

1、培養(yǎng)皿

2、培養(yǎng)瓶

3、直剪和眼科剪

4、眼科鑷和止血鉗

5、玻璃滴管

6、燒杯

7、15ml離心管

三、實(shí)驗(yàn)流程

培養(yǎng)37℃，5%CO2

2、免疫組織化學(xué)鑒定 ：利用肌動(dòng)蛋白、a-SMA或Desmin免疫熒光染色鑒別平滑肌細(xì)胞。

1) 細(xì)胞爬片。將洗凈的蓋玻片放入6孔培養(yǎng)板中，接種細(xì)胞為3×104個(gè)/孔，48小時(shí)候細(xì)胞可以長(zhǎng)滿，用鑷子取出鋪滿細(xì)胞的蓋玻片備用。

2) 細(xì)胞固定：用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌細(xì)胞，之后放入4%多聚甲醛中，固定10min，空氣中自然干燥。

3) 特異性抗體：按照說(shuō)明書(shū)稀釋比要求稀釋抗體，加入抗體，放置37℃孵育60min。

4) 洗滌：1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次 × 15 分鐘，晾干。

5) 標(biāo)記性抗體：加入熒光標(biāo)記抗體，37℃孵育30min。

6) 洗滌：1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次 × 15 分鐘，晾干。

7) 封片：封片劑封片。

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