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如何選擇合適的HIS標(biāo)簽抗體？這就來(lái)揭曉
His標(biāo)簽抗體是由6個(gè)組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽，專門設(shè)計(jì)用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His-tag 融合標(biāo)簽與其他標(biāo)簽相比有很多明顯優(yōu)勢(shì)， 是目前用于純化的融合標(biāo)簽中使用最為廣泛的一種。His抗體可以用于檢測(cè)和His標(biāo)簽融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測(cè)His融合表達(dá)蛋白等。然而，目前商品化His-tag的單克隆抗體(mAb)種類不多， 且價(jià)格也十分昂貴。
如何選擇合適的His標(biāo)簽抗體？
我們?cè)谶x擇His抗體時(shí)，主要根據(jù)自己的需要，特別是實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的需要。其中需要考慮的因素包括了，His抗體的應(yīng)用檢測(cè)類型、His抗體的克隆性及制備來(lái)源等。比如該His抗體是否能用于Western Bloting的檢測(cè)？是否可以用于免疫熒光IF實(shí)驗(yàn)？我是否需要特異性更好的單克隆His標(biāo)簽抗體？我是否需要考慮下是選擇小鼠來(lái)源的還是兔來(lái)源的His抗體？
一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)用類型越多，在使用過(guò)程中的選擇余地就越大，而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價(jià)都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外，抗體的效價(jià)也是考察該抗體性價(jià)比的重要方面，也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl His抗體（假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5，000，最終使用液相當(dāng)于500ml），要比效價(jià)低的1ml的His抗體（假如WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200，最終使用液相當(dāng)于2ml）性價(jià)比更高。因此在選擇His標(biāo)簽抗體的時(shí)候，不但需要考慮抗體的量，還需要考慮抗體的效價(jià)，即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。
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