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原理
用人結(jié)腸癌細胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結(jié)腸癌細胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體 IgG（第一抗體），二者可以發(fā)生特異性的抗原抗體反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，再加入市售（也可自制）的熒光標記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復(fù)合物進一步發(fā)生抗原抗體反應(yīng)（二次抗體反應(yīng)），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結(jié)腸癌細胞表面的存在。
材料與儀器
HeLa細胞
1640培養(yǎng)液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
蓋片 載片 培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器
1640培養(yǎng)液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
蓋片 載片 培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器
步驟
1. 將培養(yǎng)瓶中的結(jié)腸癌細胞接種到裝有蓋片的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)2~3天。
2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態(tài)良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。
3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。
4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。
5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。
6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。
8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
2. 在倒置鏡下觀察到蓋片上的細胞生長狀態(tài)良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標記，以免在以后的操作中正反面顛倒。
3. 將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。
4. 用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細胞面，以免引起細胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細胞層。
5. 將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。
6. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
7. 將已稀釋好的熒光標記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。
8. 用PBS洗三次，濾紙吸干。
9. 將載片上滴一滴液體石蠟。然后將蓋片細胞面朝下放到載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。
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安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)
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