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免疫組織化染色

來源：深圳市安培生物科技有限公司   2023年04月10日 18:01  

材料與儀器

新鮮組織
二甲苯 酒精 H2O2 抗原修復液 枸櫞酸鈉緩沖液 石蠟 福爾馬林 PBS DAB 蘇木素 樹膠 丙酮 打孔液 檸檬酸鈉 APES
恒溫搖床 高壓鍋 塑料切片架 耐溫玻璃容器 -80℃冰箱 恒冷冰凍切片機 載玻片

步驟

一．石蠟切片免疫組化染色實驗步驟：
1．石蠟切片脫蠟至水：（石蠟切片染色前應置60℃ 1 小時）。
（1）二甲苯I、II,各10 分鐘。
（2）梯度酒精：100%，2 分鐘® 95%，2 分鐘® 80%，2 分鐘® 70%2 分鐘。
（3）蒸餾水洗：5 分鐘，2 次（置于搖床）。
2．過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2，室溫10 分鐘（避光）。
3．蒸餾水洗：5 分鐘，2 次（置于搖床）。
4．抗原修復：
根據(jù)待檢測的抗原，選擇適當?shù)姆椒ā?/div>
附：抗原修復液（10mM pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液）的配制
（1）儲備液的配制：
A 液：枸櫞酸三鈉-2H2O 29.41g + 蒸餾水1000ml
B 液：枸櫞酸21g + 蒸餾水1000ml
（2）工作液的配制：A 液82ml + B 液18ml + 蒸餾水900ml
抗原修復的方法：
（1）高壓鍋處理技術：枸櫞酸鈉緩沖液（10mM，PH6.0）,淹沒切片,蓋上鍋蓋，高壓鍋內(nèi)煮沸,上汽3 分鐘后緩慢冷卻（可用自來水在高壓鍋外沖，以助冷卻）。
（2）微波處理技術:用塑料切片架,置于塑料或耐溫玻璃容器內(nèi)，枸櫞酸鈉緩沖液淹沒切片，選擇中高或高檔,5 分鐘;取出并補充已預熱的枸櫞酸鈉緩沖液；再選擇中高或高檔,5 分鐘（. 最佳溫度為92～95℃）
（3）酶消化處理：此略。
抗原修復的注意事項：
（1）組織不能干。
（2）選擇抗原修復方法要因抗體而異。
（3）該方法主要用于10%福爾馬林固定、石蠟包埋組織。
（4）抗原修復后至DAB 顯色的過程中，均需用PBS 緩沖液。
5．PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床）。

6．正常血清封閉：從染片缸中取出切片，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分（保持組織呈濕潤狀態(tài)）,滴加正常山羊或兔血清（與第二抗體同源動物血清）處理，37℃，15 分鐘。


深圳安培生物科技有限公司，是一家具有核心的技術實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線，在各個領域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術支持與服務。


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