皖儀科技液相色譜測定人參中的人參皂苷

前言

人參皂苷是人參的重要活性成分，屬于三萜類糖苷化合物，可分為原人參二醇組皂苷（PPD型皂苷）、原人參三醇組皂苷（PPT型皂苷）和齊墩果烷型等。目前，已從人參根中分離出40多種人參皂苷。

人參皂苷具有抗氧化、抗炎、血管舒張、抗過敏、抗糖尿病等多種治療作用。一些人參皂苷通過減少DNA損傷、減少宿主對突變的易感性、增加免疫監(jiān)測和細(xì)胞凋亡等顯示其抗癌特性。此外，人參皂苷還能有效改善傳統(tǒng)化療藥物的療效，防止對正常組織的損傷。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器配置

            皖儀科技LC3200系列高效液相色譜儀

        表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

1.2 測試條件

色譜柱：C18,5μm,4.6×250mm；

柱溫：35℃；

檢測波長：203nm；

流速：1.0mL/min；

流動相：A:乙腈；B:水

進(jìn)樣量：10μL；

                 表2 梯度條件

1.3 儀器及試劑、耗材    

試劑：甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1；

輔助裝置：分析天平；溶劑抽濾裝置；超聲波清洗機(jī)；

實(shí)驗(yàn)材料：濾膜：有機(jī)相濾膜，水相濾膜0.45μm

1.4 對照品制備

n  人參皂苷Rg1對照品溶液：精密稱定人參皂苷Rg1對照品15.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀釋定容至10mL，制成1.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

n  人參皂苷Re對照品溶液：精密稱定人參皂苷Rg1對照品9.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀釋定容至10mL，制成0.9mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

n  人參皂苷Rb1對照品溶液：精密稱定人參皂苷Rg1對照品15.0mg，置容量瓶中，用甲醇稀釋定容至10mL，制成1.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

混合對照品溶液：分別取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品，加甲醇制成每1mL中含人參皂苷Rg10.5mg、人參皂苷Re0.3mg、人參皂苷Rb10.5mg的混合溶液。

n  人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：取人參皂苷Rg1對照品溶液稀釋制成1mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

      圖1人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

說明：人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較好，線性相關(guān)系數(shù)＞0.9999。2.2 標(biāo)準(zhǔn)品

          圖2 人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

            表3 人參皂苷Rg1色譜參數(shù)

         圖3 人參皂苷Rb標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

           表4 人參皂苷Rb色譜參數(shù)

           圖4 人參皂苷Rb標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

            表5 人參皂苷Rb色譜參數(shù)

2.3 混標(biāo)

          圖5 人參皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

         表6 人參皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)

說明：由上述混標(biāo)譜圖可見，樣品分離較好，樣品分離度在2.2以上，滿足分離要求。2.3 樣品重復(fù)性

          圖6 人參皂苷混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表7 人參皂苷Rg1、Re、Rb1標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)性色譜參數(shù)

說明：重復(fù)性較好，人參皂苷Rg1保留時間RSD值為0.437%，峰面積RSD值為0.443%；人參皂苷Re保留時間RSD值為0.343%，峰面積RSD值為0.396%；人參皂苷Rb1保留時間RSD值為0.479%，峰面積RSD值為0.382%。

3 結(jié)論

本次采用皖儀科技高效液相色譜儀配置二極管陣列檢測器，依據(jù)《中國藥典》2020版對人參皂苷進(jìn)行含量測定，由上述數(shù)據(jù)可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較好，線性相關(guān)系數(shù)＞0.9999；人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1理論塔板數(shù)分別為91232、46835、192000，符合藥典要求理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算應(yīng)不低于6000；重復(fù)性較好，人參皂苷Rg1保留時間RSD值為0.437%，峰面積RSD值為0.443%；人參皂苷Re保留時間RSD值為0.343%，峰面積RSD值為0.396%；人參皂苷Rb1保留時間RSD值為0.479%，峰面積RSD值為0.382%；人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品分離較好，樣品分離度在2.2以上，滿足分離要求。