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萬柏隔水式細胞復蘇儀是通過快速融化的手段保證細胞外結(jié)冰晶在很短時間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞重新結(jié)晶對細胞造成損害，復蘇成功的細胞可以保持很高的活力。
當溫度進一步下降，細胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點，減少冰晶的形成，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細胞免受溶質(zhì)損傷，細胞得以在超低溫條件下保存。
在復蘇時，一般以很快的速度升溫，1-2 分鐘內(nèi)即恢復到常溫，細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生，凍存的細胞經(jīng)復蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。
冷凍保護劑對細胞的冷凍保護效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復溫速率有關(guān)。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。
冷凍保護體外培養(yǎng)物，除了必須有最佳的冷凍速率、合適的冷凍保護劑和凍存溫度外，在復蘇時也必須有最佳的復溫速率，這樣才能保證最后獲得最佳冷凍保存效果。復溫速率是指在細胞復蘇時溫度升高的速度。復溫速率不當也會降低凍存細胞存活率。一般來說，復溫速度越快越好。常規(guī)的做法是，在 370C 水浴中，于1-2分鐘內(nèi)完成復蘇。復溫速度過慢，細胞內(nèi)往往重新形成較大冰晶而造成細胞損傷。復溫時造成的細胞損傷非?？?，往往在極短的時間內(nèi)發(fā)生。
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