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非蛋白質巰基含量檢測試劑盒（微量法）
產品貨號：BA1096
產品規(guī)格：100管/48樣
產品簡介：
生物體內巰基主要包括非蛋白質巰基和蛋白質巰基。巰基化合物在體內具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調節(jié)具有非常重要的生理意義。
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
技術指標：
檢出限：0.0061 μmol/mL
線性范圍：0.00625-0.8 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
產品內容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數量配制并在當天用完；
2. 試劑二：臨用前加入2mL無水甲醇充分溶解備用；
3. 標準品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標準溶液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、離心機、恒溫水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
2. 細胞或細菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。
3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至412nm，蒸餾水調零。
2. 標準品的制備：將50μmol/mL標準溶液用提取液稀釋至0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL的標準液，現用現配。
3. 操作表
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
上清液（μL） | 60 | 60 | - | - |
標準品（μL） | - | - | 60 | - |
試劑一（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
試劑二（μL） | - | 20 | 20 | - |
H2O（μL） | 20 | - | - | 80 |
混勻，室溫放置10min，吸取200μL于微量比色皿/96孔板中測定412nm吸光值，分別記為A對照、A測定、A標準、A空白，計算ΔA測定=A測定-A對照，算ΔA標準=A標準-A空白。 | ||||
二、計算公式
1. 標準曲線的繪制：
以標準液濃度為x軸，ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白質巰基含量計算：
（1）按樣本質量計算
非蛋白質巰基含量（µmol/g 質量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培養(yǎng)液體積計算
非蛋白質巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x
（3）按細胞數量計算
非蛋白質巰基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/mL；500：500萬個細胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。
注意事項：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
非蛋白質巰基含量檢測試劑盒（微量法）
產品貨號：BA1096
產品規(guī)格：100管/48樣
產品簡介：
生物體內巰基主要包括非蛋白質巰基和蛋白質巰基。巰基化合物在體內具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調節(jié)具有非常重要的生理意義。
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
技術指標：
檢出限：0.0061 μmol/mL
線性范圍：0.00625-0.8 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
產品內容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數量配制并在當天用完；
2. 試劑二：臨用前加入2mL無水甲醇充分溶解備用；
3. 標準品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標準溶液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、離心機、恒溫水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
2. 細胞或細菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。
3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至412nm，蒸餾水調零。
2. 標準品的制備：將50μmol/mL標準溶液用提取液稀釋至0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL的標準液，現用現配。
3. 操作表
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
上清液（μL） | 60 | 60 | - | - |
標準品（μL） | - | - | 60 | - |
試劑一（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
試劑二（μL） | - | 20 | 20 | - |
H2O（μL） | 20 | - | - | 80 |
混勻，室溫放置10min，吸取200μL于微量比色皿/96孔板中測定412nm吸光值，分別記為A對照、A測定、A標準、A空白，計算ΔA測定=A測定-A對照，算ΔA標準=A標準-A空白。 | ||||
二、計算公式
1. 標準曲線的繪制：
以標準液濃度為x軸，ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白質巰基含量計算：
（1）按樣本質量計算
非蛋白質巰基含量（µmol/g 質量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培養(yǎng)液體積計算
非蛋白質巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x
（3）按細胞數量計算
非蛋白質巰基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/mL；500：500萬個細胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。
注意事項：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
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