Southern Blot印跡分析可提供關(guān)于DNA 特性、大小和豐度的信息。這種經(jīng)典技術(shù)根據(jù)DNA 大小，通過電泳對(duì)DNA 片段進(jìn)行分離，并將其轉(zhuǎn)印到膜上，與標(biāo)記的序列特異性探針雜交，洗滌，最后檢測標(biāo)記DNA 條帶。賽默飛為Southern Blot雜交分析提供了的產(chǎn)品組合之一。

從可靠的限制酶到快速便捷的E-Gel™預(yù)制瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)和BrightStar™Plus膜， 我們的產(chǎn)品不僅有助于滿足您的Southern 印跡分析需求，還可以加快實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

Southern Blot印跡雜交分步指南

第1步：DNA 消化

在目標(biāo)限制酶切位點(diǎn)獲得完整的DNA 片段是Southern 印跡雜交中的關(guān)鍵步驟。我們提供了一系列高品質(zhì)DNA 限制性內(nèi)切酶，可幫助您獲得清晰、明確的Southern 印跡數(shù)據(jù)。每種限制內(nèi)切酶經(jīng)驗(yàn)證都可以使用同一種通用緩沖液（L，M，H，K或T（+ BSA）），并提供推薦緩沖液。

推薦工具：限制內(nèi)切酶選擇工具

第2步：凝膠電泳

DNA 片段通常在瓊脂糖凝膠上電泳，并根據(jù)片段分子量進(jìn)行分離。也可以使用丙烯酰胺凝膠，其對(duì)小片段DNA（<800bp）的分辨率較好。

E-Gel®瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)非常適用于限制性酶切消化、PCR 反應(yīng)和質(zhì)粒制備的快速、高分辨率電泳。該系統(tǒng)包括凝膠電泳底座以及實(shí)時(shí)電泳觀察設(shè)備。該系統(tǒng)利用E-Gel®預(yù)制凝膠以及即用型電極和核酸染料。無需灌注凝膠，無需制備緩沖液，無需組裝凝膠盒。只需將DNA 樣品上樣，并開始電泳。了解關(guān)于E-Gel®預(yù)制瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)的更多信息。

我們提供多種DNA ladders 可用于準(zhǔn)確預(yù)估DNA 的分子量大小，包括100 bp ladders 和1 Kb Plus ladders。了解關(guān)于凝膠電泳DNA ladders 的更多信息。

推薦產(chǎn)品：

? E-Gel®EX Starter Kit, 1%

? E-Gel®EX Starter Kit, 2%

? 100 bp DNA ladder

? E-Gel®1 Kb Plus DNA ladder

? 1 Kb Plus DNA ladder

? UltraPure™ DEPC-treated water

? UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled water

? UltraPure™ Agarose 1000

? UltraPure™ 0.5 M EDTA, pH 8.0

? UltraPure™ 5 M NaCl

? UltraPure™ Tris HCl

第3步: 轉(zhuǎn)印

電泳后，將DNA 轉(zhuǎn)印到帶正電尼龍膜上。素探針一起使用，可獲得最大的雜交信號(hào)。傳統(tǒng)方法利用正向轉(zhuǎn)印方法將DNA 轉(zhuǎn)印過夜。為獲得可靠和一致的轉(zhuǎn)印結(jié)果并最小化背景，強(qiáng)烈建議使用BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜。該膜適合與放射性標(biāo)記和非同位素探針一起使用，可獲得最大的雜交信號(hào)。

為實(shí)現(xiàn)快速、可重復(fù)的轉(zhuǎn)印，iBlot®7-Min Blot 可在7分鐘內(nèi)將DNA 轉(zhuǎn)印到尼龍膜上。使用iBlot®系統(tǒng)，無需其他緩沖液或液體，從而不會(huì)對(duì)結(jié)果造成差異。

推薦產(chǎn)品：

? UltraPure™ DEPC-Treated Water

? UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled Water

? UltraPure™ 20X SSC, 4 L

? UltraPure™ 20X SSC, 1 L

? UltraPure™ 20X SSPE

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（15 x 15 cm）

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（大卷，30 cm x 3 m）

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（小卷，30 x 45 cm）

? 尼龍（.045微米，8.3 x 7.3 cm）

? iBlot®7 Min Blot

? iBlot®DNA Transfer Stacks

第4步：探針標(biāo)記

對(duì)于具有與目標(biāo)序列同源序列的核酸探針，使用放射性、熒光染料或酶（與相應(yīng)底物孵育可產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)）進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記物的選擇取決于多種因素，如探針或探針模板的性質(zhì)、所需的靈敏度、定量要求、易用性和實(shí)驗(yàn)時(shí)間等。

推薦產(chǎn)品：

? BioNick™ DNA Labeling System

? BioPrime®DNA Labeling System

? BrightStar®Psoralen-Biotin Nonisotopic Labeling Kit

? DECAprime™ II Kit, 30 rxns

? DECAprime™ II Kit, 100 rxns

? KinaseMax™ Kit

? RadPrime™ DNA Labeling System

? Random Primers DNA Labeling System

? ULYSIS®Alexa Fluor® 488 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 532 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 546 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 594 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 647 Nucleic Acid Labeling Kit

第5步：雜交&洗滌

雜交期間，在促進(jìn)互補(bǔ)序列雜交的條件下將標(biāo)記探針與固定在印跡膜上的DNA 片段一起孵育。與其他雜交溶液相比，ULTRAhyb®超靈敏雜交緩沖液在預(yù)雜交和雜交時(shí)可促進(jìn)雜交且不增加背景，使靈敏度提高100倍。至少可以檢測到10,000個(gè)目標(biāo)分子。由于ULTRAhyb®緩沖液提高了印跡的靈敏度，所以通?？梢栽诙潭?小時(shí)內(nèi)完成許多目標(biāo)分子的雜交。

雜交后，使用緩沖液洗滌多次，除去未雜交的探針。低嚴(yán)格度洗滌（如，使用2X SSC或SSPE）可除去雜交溶液和未雜交的探針。高嚴(yán)格度洗滌（如，使用0.1X SSC或SSPE）可除去部分雜交的分子探針。結(jié)果是只有雜交的標(biāo)記探針分子與目標(biāo)區(qū)域的互補(bǔ)序列保持結(jié)合。

推薦產(chǎn)品：

? ULTRAhyb®超靈敏雜交緩沖液

? ULTRAhyb®-Oligo

? 50X Denhardt’s Solution

? 鮭魚精子DNA（剪切的，10mg/ml

? UltraPure™小牛胸腺DNA溶液

? UltraPure™鯡魚精子DNA溶液

? UltraPure™鮭魚精子DNA溶液

? 甲酰胺（去離子）

? UltraPure™ 20X SSC, 1L

? UltraPure™ 20X SSPE

第6步：檢測

在檢測步驟中，使用所用標(biāo)記物對(duì)應(yīng)的方法檢測結(jié)合的標(biāo)記探針。例如，可以使用X射線膠片或磷光成像儀器檢測放射性標(biāo)記探針，以及通過孵育化學(xué)發(fā)光底物并將印跡曝光到X射線膠片來檢測酶標(biāo)記探針。

BrightStar®BioDetect™ 試劑盒包含檢測生物素化DNA探針?biāo)璧脑噭┖筒牧?。這套完整的試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可與BrightStar®-Plus膜一起使用，提供了可兼容Southern、Northern和點(diǎn)印跡的低背景、高靈敏度、非同位素檢測。BrightStar®BioDetect™ 試劑盒利用一種最明亮和壽命最長的化學(xué)發(fā)光底物——CDP-Star® 底物——具有最高的靈敏度，并且可在2天內(nèi)進(jìn)行多次曝光。

推薦產(chǎn)品：

? BrightStar®BioDetect™ Kit

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