考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

規(guī)格: 100T/96S

產品內容：

試劑一：液體25mL×1 瓶，4℃保存。

標準品：500μg/mL×1 瓶，4℃保存，臨用前用蒸餾水稀釋為50μg/mL。

產品說明：

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

在酸性溶液中，考馬斯亮藍G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物：該復合物在595nm處有最大吸 收峰。 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品中可溶性蛋白質提取

1.   液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

2.   組織樣品：按照組織質量 (g) ：提取液體積(mL)為1：5~ 10 的比例 (建議稱取約0. 1g組織，加入 1mL 提取液 (自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水) ) 。冰浴勻漿，    10000rpm ，4℃離心10min ，取上清，即待測液。  (動物樣品常常需要稀釋)

3.   細菌、真菌：按照細胞數量 (104個) ：提取液體積 (mL) 為500~ 1000：1 的比例 (建議500 萬細 胞加入1mL 提取液) ，冰浴超聲波破碎細胞 (功率300w ，超聲3 s ，間隔7s ，總時間3min ) ；然后 10000rpm ，4℃ ，離心10min ，取上清置于冰上待測。

二、吸光值測定

1.   分光光度計預熱30 min 以上，蒸餾水調零。

2.   空白管：取0.5 mL EP管，加入40μL 蒸餾水，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 空白管。

3.   標準管：取0.5 mL EP管，加入40μL 標準液，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 標準管。

4.   測定管：取0.5 mL EP管，加入40μL 待測液，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 測定管。

三、蛋白質含量：

C 待測 (μg/mL) =50×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

C 標準管：標準品蛋白質濃度，50μg/mL。

注意事項：

1.   加考馬斯亮藍后，在10~20min 內吸光值相對較穩(wěn)定，因此須在10~20min 完成比色。

2.   不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用95%乙醇沖洗。

3.   測定前用1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在0~ 100μg/ml 范圍內，否則需要做相應稀釋。

本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！

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