MethylFlash Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy Kit 是一套經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液與試劑組合，可通過(guò)比色法在簡(jiǎn)化的“一步法”ELISA 反應(yīng)中特異性地檢測(cè) 5-甲基胞嘧啶（5-mC），從而定量全球 DNA 甲基化水平。與 LUMA、LINE-1、Alu 或 LTR 等方法相比，該試劑盒可直接、更快速地測(cè)定總體甲基化。作為 EpigenTek z利技術(shù)的第四代升級(jí)版本，此試劑盒在速度、簡(jiǎn)便性、靈敏度和可重復(fù)性方面均較上一代 MethylFlash 進(jìn)一步提升。

本試劑盒還特別設(shè)計(jì)與 MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit（比色法）配對(duì)使用，可同時(shí)定量甲基化 DNA 和羥甲基化 DNA。

艾美捷MethylFlash全球 DNA甲基化（5-mC）ELISA 簡(jiǎn)易試劑盒（比色法）（#P-1030-48）優(yōu)勢(shì)與特點(diǎn)：

• 快速：步驟精簡(jiǎn)，全程僅需 2 小時(shí)

• 穩(wěn)?。焊牧寂浞綆?lái)更大的“信號(hào)窗”，復(fù)孔間變異更小

• 便捷：背景噪聲極低，無(wú)需 DNA 變性及封閉步驟

• 靈敏：z低可檢測(cè) 100 ng DNA 中 0.05% 的甲基化 DNA

• 特異：對(duì) 5-mC 高度特異，在所測(cè)濃度范圍內(nèi)不與未甲基化胞嘧啶或 5-羥甲基胞嘧啶發(fā)生交叉反應(yīng)

• 通用：包含陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照，可檢測(cè)任何物種的單鏈或雙鏈 DNA

• 準(zhǔn)確：陽(yáng)性對(duì)照可按比例梯度稀釋，結(jié)果與 HPLC-MS 高度可比

• 靈活：條孔微孔板設(shè)計(jì)，可手動(dòng)或高通量操作  

原理與流程：

試劑盒包含定量總體 DNA 甲基化所需的全部試劑。DNA 首先被固定在經(jīng)特殊處理、具備高親和力的條孔板中；隨后使用特異性捕獲抗體和檢測(cè)抗體識(shí)別甲基化 DNA，并通過(guò) TMB 底物顯色。用酶標(biāo)儀在 450 nm 讀取吸光度，所得 OD 值與甲基化 DNA 百分比成正比。

起始材料：

輸入 DNA 應(yīng)保持相對(duì)純凈（260/280 > 1.6），可用水或 TE 緩沖液稀釋。每孔 DNA 用量 5–200 ng，推薦使用 100 ng 以獲得最佳結(jié)果。DNA 可來(lái)源于任何物種（哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌、病毒）及多種樣本形式，包括但不限于：培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織、血漿/血清及體液。片段長(zhǎng)度 200 bp 至全長(zhǎng)、單鏈或雙鏈 DNA 均可適用。

使用前請(qǐng)注意：

一、適用范圍

MethylFlash™ Global DNA Methylation (5-mC) ELISA Easy Kit（比色法）可用于檢測(cè)來(lái)源于任何物種（哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌、病毒）的DNA整體甲基化水平。樣本形式多樣，包括但不限于：培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織、血漿/血清、體液等。單鏈或雙鏈DNA均可使用，片段長(zhǎng)度200 bp至全長(zhǎng)皆可。

二、DNA用量

每孔DNA上樣量為5–200 ng。為獲得最佳定量效果，推薦上樣量為100 ng。由于不同組織來(lái)源的DNA甲基化水平差異較大，且某些物種的甲基化DNA占總DNA比例可能低于1%，使用100 ng可確保結(jié)果可靠。

三、起始材料

可使用的起始材料包括：培養(yǎng)瓶或微孔板中的細(xì)胞、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織、血漿/血清、體液等。

四、內(nèi)部對(duì)照

試劑盒內(nèi)同時(shí)提供陰性及陽(yáng)性DNA對(duì)照，可繪制0.1%–5% 的標(biāo)準(zhǔn)曲線。鑒于不同組織、不同生理或病理狀態(tài)下的整體甲基化水平差異較大，建議每個(gè)樣本設(shè)復(fù)孔，以驗(yàn)證信號(hào)的可重復(fù)性。本試劑盒既可定量甲基化DNA的絕對(duì)含量，也可比較兩份DNA樣本間的相對(duì)甲基化水平。

五、操作注意事項(xiàng)

為避免交叉污染，請(qǐng)將樣本或溶液準(zhǔn)確加入條孔中。務(wù)必使用帶濾芯的吸頭，且每次移液后更換吸頭。全程佩戴手套；如手套接觸樣本，應(yīng)立即更換。