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賽默飛311培養(yǎng)箱內(nèi)細胞生長不好是什么原因?

來源:孚約生物科技(上海)有限公司   2025年07月23日 11:26  

賽默飛311培養(yǎng)箱內(nèi)細胞生長不良可能由多種因素引起,包括培養(yǎng)環(huán)境、細胞狀態(tài)、操作規(guī)范及污染問題等。以下是可能的原因及對應的解決方案:


一、培養(yǎng)環(huán)境問題

1、溫度波動

培養(yǎng)箱溫度不穩(wěn)定(如開門頻繁、校準失效或風扇損壞)會影響細胞生長。賽默飛311培養(yǎng)箱雖采用水套式保溫設計,但頻繁開關門仍可能導致溫度波動。

解決方案:定期校準溫度傳感器,減少開門時間,確保風扇正常運轉。

2、CO?濃度異常

CO?濃度偏離5%會影響培養(yǎng)基pH值,進而抑制細胞生長。CO?傳感器(如T/C或IR型)可能出現(xiàn)校準偏差。

解決方案:檢查CO?控制器,使用預標定的培養(yǎng)基監(jiān)測pH,必要時重新校準傳感器。

3、濕度不足

濕度過低會導致培養(yǎng)基蒸發(fā),滲透壓升高,影響細胞代謝。

解決方案:確保增濕盤(3.0L標準容量)中有足夠水分,并定期檢查蒸發(fā)率。


二、污染問題

1、微生物污染(細菌、真菌、支原體)

支原體污染不易察覺,但會導致細胞生長緩慢或形態(tài)異常。

解決方案:

2、定期檢測支原體污染(如PCR或熒光染色)。

若發(fā)現(xiàn)污染,清潔培養(yǎng)箱,更換HEPA過濾器(建議每6-12個月更換)。

避免長期使用抗生素,以防掩蓋污染。

HEPA過濾器失效

賽默飛311培養(yǎng)箱的HEPA過濾器可維持Class 100潔凈環(huán)境,但長期使用后過濾效率可能下降

解決方案:按提示更換過濾器,并結合高溫滅菌(如140℃ Steri-Cycle)殺滅殘留微生物。


三、細胞操作問題

1、傳代不當

消化過度或不足:胰酶作用時間過長會損傷細胞,而消化不足會導致細胞團形成。

接種密度過低:細胞間接觸抑制不足,增殖緩慢。

解決方案:優(yōu)化消化時間,按推薦密度接種(如HEK293傳代比例1:3-1:6)。

2、凍存/復蘇損傷

凍存液配方不當(如DMSO濃度錯誤)或復蘇速度過慢可能導致細胞死亡。

解決方案:使用含10% DMSO的凍存液,復蘇時37℃水浴快速融化。


四、設備維護問題

1、培養(yǎng)箱清潔不足

長期未清潔可能導致微生物滋生,尤其是不銹鋼內(nèi)壁的角落。

解決方案:定期拆卸清洗內(nèi)門襯墊、擱板,并使用70%乙醇或專業(yè)消毒劑擦拭。

2、傳感器故障

溫度、CO2或O2傳感器損壞可能導致環(huán)境參數(shù)失控

解決方案:聯(lián)系售后進行校準或更換。。


五、總結建議

若細胞生長不良,建議按以下步驟排查:

1、檢查培養(yǎng)箱參數(shù)(溫度、CO2濕度)是否穩(wěn)定。

2、檢測污染(尤其是支原體)。

3、優(yōu)化細胞操作(傳代、凍存)。

4、更換新鮮培養(yǎng)基/血清。

5、維護設備(清潔、更換HEPA過濾器)。

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