微生物分類以及凍干要點
微生物菌種的分類是一個復(fù)雜且多層次的體系,涉及形態(tài)、生理、遺傳和生態(tài)等多個方面。一般可分為原核生物(細菌、古菌)、真菌和病毒。
它的鑒定方法有:(1)傳統(tǒng)技術(shù):API試劑條(生化反應(yīng))、顯色培養(yǎng)基快速鑒定。(2)分子技術(shù):PCR擴增(如16S rRNA測序)、MALDI-TOF質(zhì)譜(快速蛋白指紋分析)。(3)宏基因組學(xué):直接從環(huán)境樣本中獲取基因組信息,鑒定未培養(yǎng)微生物。
微生物凍干(冷凍干燥)是長期保存菌種活性的重要方法,冷凍干燥保存適用于大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的保藏等。
凍干流程
1、預(yù)凍
溫度:快速降溫至 -40℃以下(避免大冰晶刺破細胞)。
2、初級干燥(升華干燥)
真空度:維持 10~30 Pa,促進冰晶直接升華。
溫度:緩慢升溫至 -20℃~0℃(根據(jù)保護劑和菌種耐受性調(diào)整)。
時間:通常 12~24小時(視樣品體積和含水量而定)。
3、次級干燥(解析干燥)
溫度:逐步升至 20℃~30℃,去除結(jié)合水。
真空度:保持<5 Pa,時間約 4~6小時。
4、封存
真空或充惰性氣體:充氮氣或氬氣后密封,避免吸潮。
儲存條件:-20℃或4℃避光保存,部分菌種可常溫保存。
凍干技術(shù)的核心是平衡脫水效率與細胞保護,需根據(jù)微生物特性定制方案。通過優(yōu)化參數(shù)和嚴格質(zhì)控,可實現(xiàn)菌種活性數(shù)十年穩(wěn)定保存。
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