永生化人胰腺間充質(zhì)干細(xì)胞 - SV40（Immortalized Human Pancreatic Mesenchymal Stem Cells - SV40）是通過將人胰腺間充質(zhì)干細(xì)胞利用猴病毒 40（SV40）大 T 抗原進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，使其獲得永生化特性的一種細(xì)胞系。以下是關(guān)于該細(xì)胞系操作使用的詳細(xì)介紹：

細(xì)胞特性與優(yōu)勢

• 永生化特性 ：經(jīng)過 SV40 大 T 抗原轉(zhuǎn)導(dǎo)后，這些細(xì)胞能夠突破正常的細(xì)胞增殖極限，實現(xiàn)無限增殖，為長期的實驗研究提供了穩(wěn)定的細(xì)胞來源。

• 保留干細(xì)胞特性 ：盡管經(jīng)過了永生化處理，但它們?nèi)匀槐Ａ袅嗽S多原始間充質(zhì)干細(xì)胞的特性，如多向分化潛能，可分化為脂肪、骨、軟骨等多種細(xì)胞類型，以及支持胰腺組織再生和修復(fù)的能力，這使得它們在研究胰腺疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、組織工程和再生醫(yī)學(xué)等方面具有重要價值。

培養(yǎng)條件

• 培養(yǎng)基 ：通常使用 PriGrow III 添加 10% 的胎牛血清（FBS）和 1% 的青霉素 / 鏈霉素溶液。也可根據(jù)具體實驗需求選擇其他適合的培養(yǎng)基，如含 10% FBS 和 1% 青霉素 / 鏈霉素的 DMEM/F12 培養(yǎng)基。

• 培養(yǎng)容器 ：推薦使用 PriCoat™ T25 培養(yǎng)瓶或 Applied Cell 細(xì)胞外基質(zhì)涂層培養(yǎng)瓶，以提供適宜的附著表面，促進(jìn)細(xì)胞的生長和粘附。

• 培養(yǎng)環(huán)境 ：在 37℃、5% CO? 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，這樣的環(huán)境有助于維持培養(yǎng)基的 pH 值和細(xì)胞的正常代謝。

凍存與復(fù)蘇

• 凍存 ：使用含 10% DMSO 的培養(yǎng)基或?qū)ｉT的凍存液作為凍存介質(zhì)。將細(xì)胞懸浮液分裝于凍存管中，每管 1×10? 個細(xì)胞左右，然后采用程序降溫的方法，先在 4℃下放置 30 分鐘，再放入 - 20℃下 30 分鐘，最后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。也可使用凍存盒，將凍存管放入凍存盒中，放置 - 80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮保存。

• 復(fù)蘇 ：從液氮中取出凍存管，迅速放入 37℃水浴中快速解凍，輕輕搖動凍存管以加速解凍過程。解凍后的細(xì)胞懸液應(yīng)立即轉(zhuǎn)移至含有適量預(yù)溫培養(yǎng)基的離心管中，輕輕吹打混勻，然后以 125xg 的速度離心 5 分鐘，棄去上清液，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于 37℃、5% CO? 的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

傳代操作

• 傳代時機(jī) ：當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)容器中的生長密度達(dá)到 80% 左右時，即可進(jìn)行傳代操作。一般來說，每周可進(jìn)行 1 至 2 次傳代，但具體的傳代頻率還需根據(jù)細(xì)胞的生長狀態(tài)和實驗需求進(jìn)行調(diào)整。

• 傳代步驟 ：首先吸除培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基，加入適量的 PBS 潤洗細(xì)胞，以去除殘留的培養(yǎng)基和雜質(zhì)。然后加入 0.25% 的胰蛋白酶 - EDTA 溶液，在顯微鏡下觀察細(xì)胞，待細(xì)胞大部分脫落時，加入等體積的培養(yǎng)基終止胰蛋白酶的作用。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以 125xg 的速度離心 5 分鐘，棄去上清液，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按照 1:2 至 1:4 的比例將細(xì)胞懸液分裝到新的培養(yǎng)瓶中，并加入適量的培養(yǎng)基，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。

注意事項

• 無菌操作 ：在整個操作過程中，包括培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇和傳代等環(huán)節(jié)，都必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，以防止微生物的污染，確保細(xì)胞的健康生長。

• 細(xì)胞狀態(tài)監(jiān)測 ：定期觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞的生長曲線，及時發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的問題，如細(xì)胞污染、生長異常等。

• 培養(yǎng)基更換 ：根據(jù)細(xì)胞的生長速度和實驗需求，定期更換培養(yǎng)基，一般每 2 至 3 天更換一次，以提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，維持細(xì)胞的良好生長狀態(tài)。