人母親 DPP 同源物 4(Smad4)是 Smad 蛋白家族的重要成員,最初因與果蠅的母親 DPP 同源物具有序列相似性而得名。它是一種多功能的轉錄因子,廣泛存在于人體的多種組織和細胞中,如胃腸道、肺、乳腺、胰腺等組織的細胞內均有表達。
Smad4 的基因定位于染色體 18q21.1,其編碼的蛋白質包含 MH1(MAD homology 1)和 MH2(MAD homology 2)兩個高度保守的結構域,以及一個連接兩者的中間區(qū)域。MH1 結構域參與 DNA 的結合,MH2 結構域則在蛋白與蛋白相互作用中發(fā)揮重要作用,包括與其他 Smad 蛋白的結合以及與上游受體激酶的相互作用。
在檢測指標方面,Smad4 的表達水平通常以蛋白質的濃度來表示,通過特定的檢測方法可準確測定其在細胞裂解液、組織勻漿、血清等樣本中的含量,為相關疾病的研究和診斷提供重要數(shù)據(jù)支持。
生理功能
Smad4 在機體的生理過程中功能多樣,尤其在 TGF-β 超家族信號通路中扮演著關鍵角色:
介導 TGF-β 超家族信號傳導:TGF-β 超家族成員包括 TGF-β、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)等,它們在細胞的生長、分化、胚胎發(fā)育等過程中發(fā)揮重要作用。當這些細胞因子與細胞膜上的受體結合后,會激活下游的 Smad 蛋白。Smad4 作為共同介導子(co-Smad),能夠與被激活的受體調控的 Smad(R-Smad)形成異源復合物,該復合物進入細胞核后,與特定的 DNA 序列結合,從而調控靶基因的轉錄,實現(xiàn)信號從細胞外到細胞內的傳遞。
調控細胞生長與分化:Smad4 通過參與 TGF-β 超家族信號通路,對細胞的生長和分化進行精準調控。在胚胎發(fā)育過程中,它參與了多種組織和器官的形成,如骨骼、腎臟、心血管系統(tǒng)等。在成體組織中,Smad4 有助于維持細胞的正常增殖速率,防止細胞異常增殖,同時促進細胞向特定方向分化,以維持組織的結構和功能穩(wěn)定。
參與細胞凋亡與腫瘤抑制:Smad4 具有一定的腫瘤抑制功能,它可以通過調控相關靶基因的表達,誘導細胞凋亡,抑制腫瘤細胞的增殖和轉移。當 Smad4 基因發(fā)生突變或缺失時,其介導的信號通路會出現(xiàn)異常,導致細胞的生長失控,進而增加腫瘤發(fā)生的風險,如胰腺癌、結腸癌等多種腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了 Smad4 的異常表達。
人母親 DPP 同源物 4 (Smad4) ELISA 試劑盒的檢測原理及應用
檢測原理
人母親 DPP 同源物 4 (Smad4) ELISA 試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的原理設計而成。該試劑盒的酶標板微孔內預先包被了抗人 Smad4 的特異性單克隆抗體,當加入待檢測的樣本時,樣本中的 Smad4 會與酶標板上的包被抗體特異性結合,形成抗原 - 抗體復合物。
洗滌去除未結合的雜質后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人 Smad4 多克隆抗體作為二抗,二抗會與復合物中的 Smad4 特異性結合,形成 “包被抗體 - Smad4 - 酶標二抗” 的夾心結構。再次洗滌后,加入底物溶液(如 TMB),HRP 會催化底物發(fā)生顯色反應,顯色的深淺與樣本中 Smad4 的含量成正比。最后,使用酶標儀測定各孔的吸光度值,根據(jù)標準品繪制的標準曲線,即可計算出樣本中 Smad4 的具體含量。
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