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ELISA實(shí)驗(yàn)攻略:樣本的收集與整理
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的免疫分析方法，其樣本收集與處理的質(zhì)量直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下是三類(lèi)常見(jiàn)ELISA樣本的詳細(xì)收集與處理方法。
一、血清樣本處理
血清是ELISA實(shí)驗(yàn)常用的樣本類(lèi)型，其處理方法相對(duì)簡(jiǎn)單但需要嚴(yán)格操作：
1.采集方法：
使用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本;
推薦使用干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血。
2.凝固處理：
將試管室溫放置自然凝固(視環(huán)境溫度10分鐘到2小時(shí)不等)；
或4℃過(guò)夜使血清充分析出；
建議傾斜試管以擴(kuò)大液面橫截面，促進(jìn)血清分離。
3.離心分離：
2-8℃條件下以5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘左右；
也可采用2500-3500rpm離心5-10分鐘；
仔細(xì)收集上清液，避免吸取中間層細(xì)胞成分。
4.保存注意事項(xiàng)：
采集過(guò)程應(yīng)避免溶血；
立即檢測(cè)或分裝保存于-20℃/-80℃；
避免反復(fù)凍融，保存期限通常為1-6個(gè)月。
二、血漿樣本處理
血漿樣本需要抗凝處理，與血清處理方法有所不同：
1.采集準(zhǔn)備：
使用含抗凝劑(如EDTA、肝素或檸檬酸鈉)的采血管；
推薦使用2.0%EDTA作為抗凝劑。
2.采集與初步處理：
采集后立即輕柔顛倒混勻5-10次；
確?？鼓齽┡c血液充分混合。
3.離心分離：
4℃條件下700-1000×g離心10分鐘；
取上層淡黃色透明液體為血漿；
嚴(yán)格避免吸取中間白色干擾層(含白細(xì)胞和血小板)。
4.保存與注意事項(xiàng)：
可立即檢測(cè)或置于冰上短期保存；
長(zhǎng)期保存建議-80℃，可儲(chǔ)存約1個(gè)月；
樣本應(yīng)避免溶血或高血脂；
如有沉淀形成，使用前需再次離心。
三、細(xì)胞培養(yǎng)上清液處理
細(xì)胞培養(yǎng)上清液常用于檢測(cè)細(xì)胞分泌的可溶性因子：
1.收集方法：
用無(wú)菌管收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液；
貼壁細(xì)胞需先用冷的PBS輕輕清洗；
懸浮細(xì)胞可直接離心收集。
2.離心處理：
1000×g離心20分鐘去除細(xì)胞碎片；
也可采用2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。
3.保存要求：
將上清液分裝保存于-20℃/-80℃；
避免反復(fù)凍融；
檢測(cè)前如有沉淀需再次離心。
四、通用注意事項(xiàng)
1.樣本質(zhì)量要求：
所有樣本應(yīng)澄清透明，無(wú)沉淀或懸浮物；
避免使用含NaN3的樣本(會(huì)抑制HRP活性導(dǎo)致假陰性)；
組織樣本應(yīng)按重量(g):體積(mL)=1:9比例加入勻漿介質(zhì)處理。
2.保存與運(yùn)輸：
-20℃保存樣本建議1-6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)；
4℃保存樣本應(yīng)在一周內(nèi)完成檢測(cè)；
運(yùn)輸需使用耐低溫、密封性好的材料；
監(jiān)控運(yùn)輸溫度，必要時(shí)選擇專(zhuān)業(yè)溫控物流。
3.檢測(cè)前處理：
所有樣本檢測(cè)前應(yīng)再次檢查澄清度；
如有沉淀或懸浮物需重新離心；
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
正確的樣本收集與處理是ELISA實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵第一步，遵循上述規(guī)范可顯著提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。不同樣本類(lèi)型可能需要特定的處理方式，建議根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)指標(biāo)選擇最合適的處理方法。
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