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synvolux無血清轉(zhuǎn)染方案

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    2025年03月28日
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上傳者
上海牧榮生物科技有限公司
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資料簡介

本方案提供了使用SAINT sRNA(目錄號:SR-2003-01、SR-2003-02、SR-2003-04)。

無血清轉(zhuǎn)染方案:

1.準備細胞進行轉(zhuǎn)染。

粘附細胞:轉(zhuǎn)染前一天,將細胞置于0.5ml生長培養(yǎng)基血清中,使細胞在轉(zhuǎn)染時融合50-80%。

懸浮細胞:在制備復合物之前,將0.5-1.5x106個細胞懸浮在0.5ml無血清生長培養(yǎng)基中。

2.讓SAINT sRNA小瓶達到室溫。

3.將SAINT sRNA充分渦旋約30秒。

4.使用1:40的siRNA(µg)與SAINT sRNA(µl)比率制備復合物。

5.對于每個轉(zhuǎn)染樣品,按如下步驟制備復合物:

a.在50µl PBS中稀釋0.125μg siRNA。

b.將5µl SAINT sRNA加入siRNA/PBS溶液中,輕輕重新懸浮。

7.在室溫下將混合物孵育5-10分鐘(溶液可能看起來渾濁)。

8.向細胞中添加復合物:

粘附細胞:從細胞中吸取生長培養(yǎng)基,并將復合物填充至0.5ml使用無血清生長培養(yǎng)基。向細胞中加入去復合物(0.5ml)。

懸浮池:將制備的復合物逐滴加入孔中。

9.在37°C的CO2孵化器中孵育細胞2-3小時。

10.在基因敲除測試前1-3天。 向孔中加入1ml含血清的生長培養(yǎng)基,并在37°C的CO2孵化器中孵育細胞,


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