背景

革蘭氏陰性菌（GNB）給全球公共衛(wèi)生造成了最嚴(yán)重的問(wèn)題之一，因?yàn)檫@種細(xì)菌對(duì)抗生素有高度耐藥性1，而且會(huì)引發(fā)肺炎、血液感染、傷口和手術(shù)部位感染、腦膜炎等感染性疾病2。細(xì)菌內(nèi)毒素是GNB細(xì)胞膜的關(guān)鍵成分，當(dāng)濃度足夠高時(shí)會(huì)引發(fā)致熱反應(yīng)（即高燒）。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）要求制藥廠進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)（BET，Bacterial Endotoxins Testing），重點(diǎn)測(cè)量注射用水（WFI，Water For Injection）、制藥原材料、成品藥、醫(yī)療器械等所有涉及注射用藥物的GNB污染程度。細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)方法主要有以下3種：1.凝膠法（Gel-Clot），2.動(dòng)態(tài)濁度法（KTA，Kinetic Turbidimetric Assay），3.動(dòng)態(tài)顯色法（KCA，Kinetic Chromogenic Assay）。

鱟試劑（LAL，Limulus Amebocyte Lysate）提取自鱟的血液，用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)。當(dāng)檢測(cè)到內(nèi)毒素時(shí)，鱟試劑級(jí)聯(lián)就會(huì)有一系列酶促反應(yīng)，酶促反應(yīng)會(huì)放大內(nèi)毒素的顯現(xiàn)。當(dāng)內(nèi)毒素與鱟試劑反應(yīng)時(shí)，內(nèi)毒素會(huì)激活酶級(jí)聯(lián)中的第一個(gè)因子——C因子，然后C因子會(huì)激活B因子。B因子會(huì)作用于凝固酶原，使其成為凝固酶。最后的檢測(cè)步驟就是凝固（用凝膠法）、濁度（用動(dòng)態(tài)濁度法）或顯色（用動(dòng)態(tài)顯色法）。

Sievers Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀

Eclipse檢測(cè)儀由以下3部分組成：儀器、微流控微孔板、軟件。儀器是一臺(tái)吸光度分析儀，具有37°C恒溫培養(yǎng)控制和離心技術(shù)。微孔板內(nèi)預(yù)置了細(xì)菌內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品（RSE，Reference Standard Endotoxin）和陽(yáng)性產(chǎn)品對(duì)照（PPC，Positive Product Controls），允許用戶在每次化驗(yàn)時(shí)運(yùn)行最多5點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線（濃度為50-0.005 EU/mL），以及最多21個(gè)樣品及陰性和陽(yáng)性對(duì)照。Eclipse軟件操作簡(jiǎn)便，符合《聯(lián)邦法規(guī)21章》第11款（21 CFR Part 11）的規(guī)定。

目的和范圍

鱟試劑（LAL）化驗(yàn)易受干擾。樣品中可能含有抑制或增強(qiáng)內(nèi)毒素檢測(cè)的物質(zhì)，因此產(chǎn)生假性結(jié)果。需要對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行方法適用性測(cè)試和抑制/增強(qiáng)測(cè)試，以確定克服上述干擾所需的稀釋倍數(shù)（或其它有效方法）。

本應(yīng)用文獻(xiàn)概述了如何進(jìn)行抑制/增強(qiáng)測(cè)試，如何運(yùn)行此測(cè)試來(lái)證明Sievers Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀的適用性，以及提供運(yùn)行樣品的方法適用性。方法信息包括：所用的鱟試劑化驗(yàn)方法、化驗(yàn)靈敏度（λ）、驗(yàn)證的稀釋倍數(shù)、PPC（陽(yáng)性產(chǎn)品對(duì)照）加標(biāo)濃度、稀釋劑、%CV（變異系數(shù)）標(biāo)準(zhǔn)、以及平均PPC回收率。

樣品信息包括：樣品濃度（單位為mg/mL）、內(nèi)毒素限值（EL，Endotoxin Limit；單位為EU/mL）、最大有效稀釋倍數(shù)（MVD，Maximum Valid Dilution）、最小有效濃度（MVC，Minimum Valid Concentration）、平均樣品結(jié)果（單位為EU/mL）、以及樣品儲(chǔ)存/處理?xiàng)l件。

Sievers Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀：高效便捷的解決方案

Sievers Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀可以高效運(yùn)行抑制/增強(qiáng)測(cè)試，以及上述3批次產(chǎn)品驗(yàn)證程序。此款檢測(cè)儀采用先進(jìn)的離心技術(shù)和動(dòng)態(tài)方法，簡(jiǎn)化了內(nèi)毒素檢測(cè)流程。上述優(yōu)點(diǎn)使得此款檢測(cè)儀能夠更快、更精確地報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，并提供準(zhǔn)確的定量分析和干擾分析。

Sievers Eclipse檢測(cè)儀的優(yōu)點(diǎn)還包括：

•高效：自動(dòng)化功能減少了化驗(yàn)設(shè)置和移液的操作步驟，提高了通量。

•直觀：直觀的用戶界面簡(jiǎn)化了操作步驟，減少了錯(cuò)誤，提高了數(shù)據(jù)質(zhì)量。

•合規(guī)性：此款檢測(cè)儀滿足有關(guān)藥典測(cè)試和數(shù)據(jù)可靠性的嚴(yán)格法規(guī)要求。

Sievers Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀是細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)領(lǐng)域的一項(xiàng)重大的技術(shù)進(jìn)步，為持續(xù)進(jìn)行的產(chǎn)品驗(yàn)證需求提供了全面、高效、合規(guī)的解決方案，提高了產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量。

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