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2022
06-20

反相色譜柱在使用緩沖液中需要注意些什么？
反相色譜柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟和有效的保護，延長了色譜柱的壽命，分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時間的增加，高效液相色譜柱分離效能下降，柱壓增高，其原因主要是由于色譜柱進口段的少量填料被污染引起的，而色譜柱整個柱床并未被破壞，使用保護柱，相當(dāng)于在色譜柱前增加了一段額外的填料，起到了保護整個色譜柱的作用。反相色譜柱特點：采用高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)；高的柱間重現(xiàn)性；高的選擇性和分離效率；適合分離酸性、中性和堿性化合物，以及許多藥物和多肽等。反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點：1.避
2022
06-14

深入了解液相色譜柱小型化
雖然質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學(xué)（蛋白質(zhì)組學(xué)、脂質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、食物組學(xué)和糖組學(xué)）領(lǐng)域的強大工具。組學(xué)研究經(jīng)常受到樣本復(fù)雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復(fù)雜的樣品基質(zhì)（生物流體和單細胞分析）時，對感興趣的分子進行識別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內(nèi)徑(ID)會降低色譜稀釋度并提高靈敏度，從而實現(xiàn)更高效的MS/MS采樣，從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。當(dāng)樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時，就會發(fā)生這種稀釋。在這種情況下，更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋，這是
2022
06-10

液相色譜的基礎(chǔ)知識
液相色譜作為常用的色譜被廣泛應(yīng)用于生物、化學(xué)、食品分析等領(lǐng)域，hplc的種類有哪些？恒譜生帶你了解！一、液相色譜的種類1、吸附色譜以硅膠或氧化鋁為固定相。分子與硅膠之間的弱相互作用鍵稱為吸附，鍵的溶解解吸。由于洗脫液分子先于樣品分子占據(jù)硅膠的活性位點，因此樣品分子只有在與活性位點的相互作用強于洗脫液分子時才能被吸附。樣品分子通過偶極-偶極相互作用可逆地結(jié)合到固定相。固定相對物質(zhì)的保留時間取決于與固定相表面相互作用的程度不同。這是分離樣品成分的機制。2、親和層析使用物質(zhì)相互反應(yīng)的趨勢作為一種色譜方
2022
06-08

c18固定相在反相方面常用的原因及其工作原理
將C18固定相稱為用的最多的化學(xué)物質(zhì)之一可能更合適。在色譜柱供應(yīng)商中，這一階段的不斷增長的品種肯定不少。然而，在我們深入研究手頭的主題之前，這里簡要回顧一下C18固定相是如何產(chǎn)生的。一、反相色譜隨著更多科學(xué)家參與反相色譜該領(lǐng)域，色譜中引入了額外的分離模式，以分離和純化許多不同基質(zhì)中的多種化合物。在色譜中，首先從色譜柱中洗脫的是離子型和強極性分析物，疏水性更強的分析物其次。與Tsvet的實驗相比，這些化合物以相反的順序洗脫。因此，該系統(tǒng)被稱為“反相”色譜。RP技術(shù)的最終目標(biāo)是分離具有不同疏水程度的
2022
06-06

高效液相色譜的部件介紹
高效液相色譜(HPLC)是一種流行且用途廣泛的技術(shù)，可為復(fù)雜有機樣品的成分的分離、鑒定和定量提供經(jīng)濟實惠的解決方案。了解各個組成部分以及每個組成部分如何有助于分析的整體可靠性非常重要。一、高效液相色譜及其部件介紹系統(tǒng)主要組成部分為：泵、探測器；根據(jù)應(yīng)用產(chǎn)生無限數(shù)量的其他配置。比如流動相、色譜柱、管線、保護柱等。二、什么是高效液相色譜？HPLC是一種用于分離、鑒定和量化混合物中成分的技術(shù)。特別適用于不易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定和高分子量的化合物。1、流動相液相以恒定速率泵送到裝有固定相的柱中。在進入色譜柱之
2022
06-02

色譜分析里的柱層析
柱層析被描述為一種色譜常用的技術(shù)，其中待分離的物質(zhì)被置于裝有吸附劑（固定相）的柱子的最高點上，以不同的速率通過柱子，這取決于每種物質(zhì)對吸附劑的親和力。吸附劑和溶劑或溶劑混合物，并且通常在不同時間從柱中通過時聚集在溶液中。兩種最常見的柱色譜固定相是硅膠和氧化鋁，而有機溶劑被認(rèn)為是最常見的流動相。一、柱層析原理柱層析的主要原理是在固定相的幫助下吸附溶液中的溶質(zhì)，然后將混合物分離成獨立的成分。當(dāng)流動相與需要分離的混合物一起從色譜柱頂部進入時，混合物中的各組分以不同的速率運動。與對固定相的較大吸附性和親
2022
05-30

高效液相色譜柱的維護
使用高效液相色譜（HPLC）分析樣品廣泛應(yīng)用于藥物成分分析、食品添加劑測定和環(huán)境樣品測試是目前普遍的一個方法。由于液相色譜柱在許多實驗室中是核心設(shè)備且價格昂貴，因此保護其免受損壞是延長色譜柱壽命和降低成本的首要考慮因素。維護良好的色譜柱還可產(chǎn)生一致、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，支持可靠的分析結(jié)果。1.如何提高色譜柱的性能？色譜柱性能取決于許多因素，包括樣品特性、不溶性顆粒的存在以及使用后的清潔和維護。然而，并非所有的實驗條件在使用期間都是理想的。例如，一些樣品具有苛刻但必要的pH條件。因此，液體分析柱的預(yù)防性維
2022
05-18

來看看制備柱主要特點的詳細分析
制備柱具有各種尺寸，可以實現(xiàn)高分辨率分析和快速的分析。在制備色譜中，達到高純度、高回收率和高通量的分離十分重要。制備柱主要應(yīng)用在植物化學(xué)、藥物合成、生物化學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品的提取及純化工作中。不同的工作領(lǐng)域中組分的制備和純化量的差異較大。在生物技術(shù)領(lǐng)域中，酶的分離是μg級；在天然產(chǎn)物化學(xué)和合成化學(xué)領(lǐng)域中，為應(yīng)對未知成分定性鑒別、結(jié)構(gòu)測定、生物活性測試等要求，需要純化若干mg級的高純物；在藥品和醫(yī)藥學(xué)測試中，需要g級的標(biāo)準(zhǔn)品和對照品；在工業(yè)級提純中，目標(biāo)產(chǎn)物工業(yè)化生產(chǎn)往往需要kg級的分離純化。制備柱產(chǎn)
2022
05-13

液相色譜柱的五大填裝方法
1.高壓勻漿法裝填液相色譜柱將填料懸浮在適宜的勻漿液中制成勻漿，在其尚未沉降之前，很快以高壓泵將其以很高的流速壓進柱中，便可制備出填充均勻的柱子。這是常見的分析和制備色譜柱的裝填方法。2.濕法裝填對于柱、特別是現(xiàn)在流行的以3-10μm細柱徑填料填裝的分析柱，則必須使用濕法，即勻漿法裝柱。因為，隨著粒徑的縮小，因靜電作用和表面能的加大，粒子間傾向于聚集和“粘結(jié)”，若以干法填裝，它們會粘附在連接管及柱壁上，也會因強烈的靜電作用彼此排斥，因而難以填裝出均勻而緊密的柱床。這樣，必須改以濕法裝填，即將填料
2022
05-11

C18柱的規(guī)格對色譜柱的影響
C18色譜柱因鍵合方式的不同、粒徑的不同、長度的不同，內(nèi)徑的差異等多方面因素，呈現(xiàn)出不同選擇性。柱填料的選擇關(guān)系到色譜分離的可能性，而柱規(guī)格的選擇直接影響分析速度、分離能力、檢測能力及每次分析的溶劑消耗等。柱規(guī)格包括兩方面：柱內(nèi)徑和柱長度。柱內(nèi)徑，分析型一般為2～6mm,制備型20mm，大者可達80mm；柱長度，分析型5～30cm，制備型15～50cm。一般來說，柱內(nèi)徑不影響分離度與分析時間的關(guān)系。今天，柱技術(shù)已發(fā)展到不同柱內(nèi)徑的柱子能夠具有相同的性能。不同內(nèi)徑的柱子又各具特點，對相同的分析時間
2022
04-19

選擇C18色譜柱時應(yīng)注意哪些方面？
1)在pH值正常范圍內(nèi)(2~8)可選用現(xiàn)代高純硅膠色譜柱，具有峰形好，重現(xiàn)性高和壽命長的特點，選用較短的柱子可以提高分離效率，選用較長的柱子可以增加保留，選用小顆粒度的填料可以提高分離度，對分子量大的組分宜選用大孔徑填料的色譜柱。2)分離極性大的組分(流動相水相過大)采用AQ類似的色譜柱。3)分離生物堿類的化合物選用經(jīng)過烷基化處理封口的填料可防止堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。4)極端酸性條件下(pH小于2)選用ZorbaxStableBondC18類色譜柱或者寬pH值色譜柱。5)低端堿性條件下(pH大于
2022
04-09

hplc液相色譜系統(tǒng)準(zhǔn)備緩沖液的技巧
液相色譜是世界各地實驗室使用的流行純化技術(shù)。如果系統(tǒng)設(shè)置和操作正確，它可以立即從混合物中分離出所需的化合物。學(xué)習(xí)如何使用和制備緩沖液和溶劑是能提高系統(tǒng)性能的重要技巧之一。準(zhǔn)確制備和正確選擇緩沖液對于在液相色譜中獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。一、了解您的化合物如果您正在尋找混合物中的特定化合物，您應(yīng)該使用最能將您的分析物與其他分析物分開的緩沖液/溶劑組合。例如，了解極性和溶解度（極性或非極性）、電離、您正在尋找的紫外吸光度將有助于指導(dǎo)您使用特定的色譜柱和溶劑組。二、純度使用較低等級且成本較低的試劑來制
2022
04-09

使用制備液相色譜的工作流程和技巧
本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完mei的協(xié)議適合每一種分離目的。因此，建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測試，您將輕松純化您正在尋找的組件。一、快速液相色譜純化使用快速色譜法進行純化的缺點是該方法固有的分辨率較低?？焖僖合嗌V柱使用更大的粒徑和柱容量，允許使用更多的起始材料，但以分辨率和純度為代價。如果化合物不需要更高的純度，或者如果下一步將進行HPLC，這可能是您的選擇。1、確定溶劑系統(tǒng)樣品的純度（即混合物中有多少化合物）可以使用薄層色譜法
2022
03-28

質(zhì)譜和液相色譜介紹
質(zhì)譜(MS)使研究人員能夠研究許多特性，例如樣品的分子量、結(jié)構(gòu)、特性、數(shù)量和純度。當(dāng)與液相色譜技術(shù)相結(jié)合能成為一種強大的分析工具，能夠從復(fù)雜的生物混合物（如牛奶、血清和全脂）中提取有關(guān)一系列化合物的有意義的數(shù)據(jù)，包括藥物代謝物、肽和蛋白質(zhì)-細胞裂解物。一、液相色譜與質(zhì)譜在將樣品引入MS儀器之前，通常通過過濾掉顆粒物、濃縮分析物、脫鹽和通常分離出可能導(dǎo)致背景離子或抑制電離的化合物來制備樣品。大多數(shù)情況下，許多或所有這些步驟都是由HPLC、UPLC系統(tǒng)完成的。樣品制備需要對樣品進行預(yù)處理。比如流動相
2022
03-21

選擇還是不選擇UHPLC
UHPLC是一種專門的色譜方法，與HPLC相比，它運行速度更快、分辨率更好并且使用的溶劑更少。UHPLC通過使用填充較小顆粒（通常直徑小于2µm）的較小色譜柱來實現(xiàn)這一點。生物化學(xué)、細胞和分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和許多其他領(lǐng)域的研究人員依靠UHPLC從混合物中分離不同類型的分子——無論這些分子是蛋白質(zhì)、肽、代謝物、藥物化合物還是其他化學(xué)物質(zhì)。盡管UHPLC的性能明顯更好，但它并不總是*。在您考慮改用UHPLC時，恒譜生將幫助您區(qū)分重要和不重要的內(nèi)容。一、為什么選擇UHPLC？盡管UHPLC和HPLC
2022
03-16

HPLC 色譜柱挑選指南
一、分離模式選擇色譜柱的首要任務(wù)是選擇分離模式。分離分子的方法有很多，其中應(yīng)用*泛的包括反相、正相、親水相互作用、離子交換和尺寸排阻HPLC。還有一些不太常見但更專業(yè)的分離模式，例如使用手性固定相或流動相的特定手性色譜。反相色譜柱通常用于非極性或弱極性有機化合物，它包含非極性固定相（如C18），通常與極性流動相配對。恒譜生C18AQ反相色譜柱在水下?lián)碛?產(chǎn)品的壽命，適于極性較大的物質(zhì)在高水相條件下的分析。但是該方法不適合應(yīng)用于蛋白質(zhì)，流動相通常含有低pH值的乙腈或甲醇，可能會使蛋白質(zhì)變性，因此會
2022
03-09

色譜柱的再生和保存方法說明
當(dāng)保護柱或色譜柱的壓力漸升時，可通過以下方法對問題配件進行清洗再生。注意：清洗色譜柱時需要將保護柱和抑制器、電導(dǎo)池取下，連接順序是泵→六通閥→色譜柱(需要反接)→廢液管；清洗保護柱時需要將色譜柱和抑制器、電導(dǎo)池取下，連接順序是泵→六通閥→保護柱(需要反接)→廢液管親水性離子污染按以下步驟沖洗(流量0.5mL/min)1、反接柱子(保護柱或色譜柱)注意：一定要將抑制器從流路中斷開，避免損壞抑制器。2、100分鐘：10倍淋洗液濃度的溶液(起清洗作用的主要是Na2CO3)3、100分鐘：正常濃度淋洗液
2022
03-07

維護液相色譜柱良好狀態(tài)指南
將色譜柱保持在最佳狀態(tài)將大大有助于改進和標(biāo)準(zhǔn)化您的分離操作，同時確保色譜柱的使用壽命。您可以采取以下措施來實現(xiàn)這一目標(biāo)。一、注意清潔。如果您從一開始就注意并定期清潔，那么色譜柱的使用壽命會更長。清潔色譜柱所需的溶劑、酸或堿的類型取決于它們的設(shè)計和吸附劑的具體類型。雖然有些色譜柱需要使用氫氧化鈉，但該溶液會損壞其他色譜柱中的吸附劑。請按照色譜柱的說明書進行操作。二、儲存條件也很重要。很多人沒有考慮如何存儲液相色譜柱，細菌會在緩沖液的中性環(huán)境中成長。通過水流過色譜柱來防止細菌生長，然后將色譜柱放入抑
2022
03-07

色譜保護柱安裝在哪個位置？
液相色譜的保護柱，顧名思義是用來過濾樣品和流動相中的雜質(zhì)，保護色譜柱，延長色譜柱的使用壽命的安裝位置通常在進樣器之后，色譜柱前端。保護柱再選擇時分兩種：一種是獨立式卡套保護柱?？ㄌ變?nèi)放有柱芯，柱芯內(nèi)含有填料，柱芯可以更換，而柱芯是根據(jù)色譜柱的類型來選擇的。另一種是一體化卡套保護柱。這是一種特殊的色譜分析柱構(gòu)造，色譜柱前端是一體化的，可以直接打開保護柱卡套。這種保護柱帶來的死體積較小，但是分析柱選擇時成本較普通分析柱更高。值得注意的地方，保護柱的柱芯除了需要根據(jù)色譜柱的類型進行選擇，在第一次使用時
2022
02-28

超高效液相色譜—UHPLC改進大蛋白質(zhì)分子的分離度
初次將UHPLC用于小分子分離時，能得到很好的峰形，但是蛋白質(zhì)峰的分離幾乎沒有那么好，因此通常不可能顯著縮短運行時間。然而，最近對蛋白質(zhì)進一步改進讓UHPLC可以提供更好的分離度和更短的運行時間。雖然UHPLC不能讓科學(xué)家始終看到蛋白質(zhì)之間的所有差異，但它可以讓他們看到一些差異——例如，在大體形態(tài)、二硫化物異構(gòu)體、脫氨基作用和蛋白質(zhì)折疊方面。蛋白質(zhì)研究人員使用不同的色譜模式來實現(xiàn)這一目標(biāo)，例如反相色譜(RPC)、離子交換色譜(IEX)和尺寸排阻(SEC)色譜。為了成功分離出蛋白質(zhì)的細微變化，可以

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