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中級(jí)會(huì)員 | 第5年
細(xì)胞結(jié)構(gòu)中的神奇細(xì)胞器:脂滴2024/01/30
今天我們要來(lái)聊一下細(xì)胞結(jié)構(gòu)里面的一個(gè)神秘小東西-脂滴沒錯(cuò)沒錯(cuò),你沒看錯(cuò)!這就是那些小小的圓圓的、像是浸泡在脂肪里的小球球!它們的外觀看起來(lái)就像是脂肪掉進(jìn)了細(xì)胞里,而且它們還有著各種神奇的功能。那么,脂滴到底是什么呢?它們是由一種叫做“脂質(zhì)”的化學(xué)物質(zhì)組成的。脂滴是脂質(zhì)和能力穩(wěn)態(tài)中心的儲(chǔ)存細(xì)胞器。它們具有不一樣的結(jié)構(gòu),由中性脂質(zhì)的疏水核心組成,該核心由磷脂單層包圍,磷脂單層由一組特定的蛋白質(zhì)修飾。脂質(zhì)本質(zhì)上就是脂肪酸和甘油的混合物,它們?cè)诩?xì)胞里的主要功能就是作為能量?jī)?chǔ)備。脂滴不僅僅是細(xì)胞內(nèi)的能量?jī)?chǔ)
實(shí)驗(yàn)室常見有毒試劑2024/01/29
實(shí)驗(yàn)室最毒的17種試劑:1DMSODMSO是二甲基亞砜,用途廣泛。用作乙炔、芳烴、二氧化硫及其他氣體的溶劑以及腈綸纖維紡絲溶劑。是一種即溶于水又溶于有機(jī)溶劑的極為重要的非質(zhì)子極性溶劑。對(duì)皮膚有非常強(qiáng)的滲透性,有助于藥物向人體滲透。也可作為農(nóng)藥的添加劑。也是一種十分重要的化學(xué)試劑。DMSO也是一種滲透性保護(hù)劑,能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn),減少冰晶的形成,減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害,改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。但是研究表明,DMSO存在嚴(yán)重的毒性作用,與蛋白質(zhì)疏水集團(tuán)發(fā)生作用,導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性,
激活下丘腦中的這種神經(jīng)元,可顯著延長(zhǎng)壽命、減緩衰老2024/01/26
近年來(lái)的研究提示,身體器官和組織之間的組織間通訊功能是衰老的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器。當(dāng)這些通訊暢通時(shí),身體的器官和系統(tǒng)能夠很好地協(xié)同工作。但隨著年齡的增長(zhǎng),這些通訊會(huì)惡化,器官無(wú)法獲得正常運(yùn)作所需的分子和電信號(hào),導(dǎo)致各種衰老表型并限制壽命和健康壽命。在哺乳動(dòng)物中,下丘腦充當(dāng)高級(jí)「衰老控制中心」,抵消與年齡相關(guān)的病理生理變化,從而延長(zhǎng)壽命,因此,維持下丘腦功能對(duì)于對(duì)抗衰老表型和延長(zhǎng)壽命及健康壽命至關(guān)重要。這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),存在一條連接大腦和身體脂肪組織的關(guān)鍵通信通路,該通路似乎對(duì)全身能量產(chǎn)生至關(guān)重要,DMHPpp
多功能細(xì)胞因子IL-62024/01/24
簡(jiǎn)介:白細(xì)胞介素-6(簡(jiǎn)稱IL-6)是一種由免疫系統(tǒng)細(xì)胞細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)分子,屬于細(xì)胞因子家族的一員。IL-6在免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)和體內(nèi)平衡調(diào)節(jié)中起著重要作用。同時(shí)也參與了多種生理和病理過程。IL-6的作用方式與特點(diǎn):免疫調(diào)節(jié):IL-6在免疫系統(tǒng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用,它能夠刺激白細(xì)胞(包括B細(xì)胞、T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)的增殖和分化,尤其是B細(xì)胞的活化,從而促進(jìn)抗體產(chǎn)生。炎癥反應(yīng):IL-6作為典型的炎癥介質(zhì),它在感染、組織損傷和炎癥過程中產(chǎn)生并釋放,從而參與調(diào)控各類炎癥反應(yīng)(發(fā)熱、疼痛、紅腫和局部白細(xì)
細(xì)胞培養(yǎng)中究竟要不要加抗生素?2024/01/24
簡(jiǎn)介:提到細(xì)胞污染,大家想到較多的是細(xì)胞中的細(xì)菌、渾濁的培養(yǎng)基、培養(yǎng)瓶中的非法入侵者等。此外,病毒和化學(xué)污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)物的健康也非常重要,確保細(xì)胞株不存在交叉污染也是獲得可重復(fù)結(jié)果的關(guān)鍵因素??刂莆廴镜年P(guān)鍵是如何檢測(cè)出污染。細(xì)菌、真菌和酵母污染物通常是肉眼可見的,或許能迅速殺死細(xì)胞,但微妙的形態(tài)可能使重要的微生物入侵者像支原體一樣難以被檢測(cè)到。相比之下,傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡無(wú)法檢測(cè)到病毒,因此病毒污染通常是在觀察到無(wú)法解釋的分離、細(xì)胞健康較差的其他跡象或甚至是細(xì)胞死亡時(shí)才被發(fā)現(xiàn)的??偨Y(jié):抗生素雖然減少
THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)方法和注意事項(xiàng)2024/01/23
簡(jiǎn)介:THP-1細(xì)胞是從急性單核細(xì)胞白血病患者外周血中分離出來(lái)的單核細(xì)胞,廣泛應(yīng)用于單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相關(guān)機(jī)制、信號(hào)通路等研究;形態(tài)和分化特性類似于原代單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,在體外,常用PMA(phorbol12-肉豆酸酯13-乙酸酯)或1α,25(OH)2D3(1α,25-二羥基維生素D3或vD3)誘導(dǎo)分化THP-1細(xì)胞為巨噬細(xì)胞。因此,THP-1單核細(xì)胞已被開發(fā)為體外極化單核細(xì)胞來(lái)源的巨噬細(xì)胞的有吸引力的模型。原理:一、THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)方法1.細(xì)胞復(fù)蘇準(zhǔn)備工作:15/50mL的離心管,馬克
移液器的使用技巧2024/01/23
簡(jiǎn)介:移液器是日常實(shí)驗(yàn)中非常常見的儀器之一,正確使用移液器不僅可延長(zhǎng)移液器的使用壽命,也可保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,減少實(shí)驗(yàn)誤差。目前較為常見的移液器品牌主要有德國(guó)Eppendorf移液器、法國(guó)Gilson移液器及國(guó)產(chǎn)Dragonmed移液器等,接下來(lái)就和大家分享移液器的使用方法及使用技巧供初學(xué)者參考,分享主要包括三個(gè)重要的方面,包括“使用前”、“使用中”及“使用后”。使用前:1.熟悉整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程,選擇適宜量程的移液器。常見的量程包括0.5-5ml、100-1000μl、20-200μl、10-10
細(xì)胞長(zhǎng)不好的原因與解答!2024/01/23
細(xì)胞長(zhǎng)不好的原因與解答:培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁:可能原因:1.胰蛋白酶消化過度;2.支原體污染;3.培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解);4.細(xì)胞老化;5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;2.分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;3.使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2;、4.啟用新的保種細(xì)胞;5.調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。懸浮細(xì)胞成簇可能原因:1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子;2.支原體污染;3.蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解;4
Trizol法和柱式法RNA提取的實(shí)驗(yàn)流程和注意事項(xiàng)2024/01/23
實(shí)驗(yàn)原理:(一)Trizol法Trizol是一種酸性試劑,能從細(xì)胞和組織中快速分離RNA,其主要成分為異硫氰酸胍(GITC)和苯酚。裂解細(xì)胞后,GITC能使蛋白質(zhì)和RNase變性,有利于保護(hù)RNA的完整性;加入氯仿離心后,樣品分為水相和有機(jī)相,RNA存在于上層水相中,而DNA和蛋白質(zhì)則存在于中間層及下層有機(jī)相中,從而達(dá)到分離的目的。簡(jiǎn)單來(lái)講就是裂解細(xì)胞使RNA得以釋放,加之有機(jī)溶劑使RNA與DNA、蛋白質(zhì)分離,并進(jìn)一步純化得到RNA的過程。試劑、儀器與耗材:Trizol試劑、氯仿、異丙醇、75%
CHO細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)分享2024/01/22
簡(jiǎn)介:CHO細(xì)胞(Chinesehamsterovarycell,CHO)一個(gè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞系,1957年從中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞得到。CHO細(xì)胞目前是現(xiàn)代制藥企業(yè)進(jìn)行研發(fā)、生產(chǎn)生物治療藥物(單抗、酶、激酶和激素等)中常用的非人類哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。原理:培養(yǎng)基無(wú)特殊要求,可有多種選擇,一般用DMEM(高糖)培養(yǎng)基+10%胎牛血清+2%雙抗。置于37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每隔48h換液,或當(dāng)培養(yǎng)基呈現(xiàn)熒光黃色及時(shí)換液,否則細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)大規(guī)模脫落和變形死亡。當(dāng)單層培養(yǎng)細(xì)胞匯合達(dá)90%以后(兩天左右),棄去培養(yǎng)
用于μ細(xì)胞培養(yǎng)載玻片的架子2024/01/22
用于存儲(chǔ)和處理µ-Slides的架子µ-Slide底部不會(huì)被劃傷可輕松將載玻片從培養(yǎng)箱和工作臺(tái)之前來(lái)回移動(dòng)油浸顯微鏡檢查后的理想儲(chǔ)存可放置八張載玻片技術(shù)特點(diǎn):并行處理最多八張µ-Slide可堆疊允許通過µ-Slides底部輕松進(jìn)行氣體交換規(guī)格:長(zhǎng)*寬:215*90平方毫米高度:24.5毫米可堆疊:是的兼容于:ibidiu-Slides顯微鏡載玻片材料:陽(yáng)極氧化鋁消毒:可高壓滅菌,酒精應(yīng)用:µ-載玻片在培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)期間u-slides的處理深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的
細(xì)胞培養(yǎng)如何杜絕污染?2024/01/22
下表列出了幾乎所有的需要注意的細(xì)節(jié),大家可以對(duì)照自己的操作和習(xí)慣進(jìn)行檢查,也可以將圖片下載保存或者收藏,等到自己成為大師兄,就有材料“教育“小師弟啦!工作區(qū)域:1.細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥設(shè)置是否正確?2.細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥所在區(qū)域有無(wú)氣流和直接出入通道?3.工作臺(tái)面是否整潔?4.是否僅僅放置了實(shí)驗(yàn)所需的物品?5.開始工作前用70%乙醇擦拭工作臺(tái)面了嗎?6.是否定期對(duì)培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜及其他實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒?個(gè)人衛(wèi)生:1.您洗手了嗎?2.您穿戴個(gè)人防護(hù)設(shè)備了嗎?3.如果您留了長(zhǎng)發(fā),頭發(fā)是否扎在后面了?4
細(xì)胞爬片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟2024/01/22
原理:免疫組織化學(xué)技術(shù):檢測(cè)組織原位表達(dá)的肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質(zhì)。(一)組織和細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備組織標(biāo)本的取材-取材新鮮,固定及時(shí),形態(tài)完好。細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備(1)活體細(xì)胞標(biāo)本:印片法、穿刺吸取法、沉淀法(2)培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本:①細(xì)胞涂片:將細(xì)胞制成懸液(10^6)涂在涂有切片粘合劑的載玻片上,晾干后固定(細(xì)胞甩片)。②細(xì)胞爬片:將細(xì)胞直接培養(yǎng)在蓋玻片上將細(xì)胞直接培養(yǎng)在6孔或9孔板上。3.固定(1)保持形態(tài):終止和抑制外源性和內(nèi)源性酶活性,防止組織細(xì)胞的死后變化,防止自
H22細(xì)胞培養(yǎng)流程及注意事項(xiàng)2024/01/18
簡(jiǎn)介:小鼠肝癌細(xì)胞H22(武漢普諾賽)又稱Hepatoma-22或Hepatoma22,其分離自Balb/c小鼠腹水,由大連醫(yī)科學(xué)院建立。H22細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈淋巴母細(xì)胞樣。H22細(xì)胞常用于小鼠肝癌組織造模,在評(píng)估抗腫瘤藥物的療效、探究腫瘤微環(huán)境對(duì)肝癌進(jìn)展的影響、揭示肝癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制等方面的研究中有著廣泛應(yīng)用。主要耗材及儀器:15ml離心管、50ml離心管、凍存管、巴氏滴管、培養(yǎng)瓶、封口膜、CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)、顯微鏡、生物安全柜、RPIM-1640、胎牛血清(FBS)、青-鏈
小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本制作實(shí)驗(yàn)2024/01/18
實(shí)驗(yàn)原理:在小鼠骨髓細(xì)胞中,有絲分裂旺盛,因此可以直接得到中期細(xì)胞而不必像血淋巴細(xì)胞那樣要經(jīng)過體外培養(yǎng)。骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性,經(jīng)秋水仙素(秋水仙堿)處理后,使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期,再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟,可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本。通過骨髓得到染色體是比較簡(jiǎn)便的,一般也無(wú)需無(wú)菌操作。在臨床上多用于白血病的研究,在實(shí)驗(yàn)條件下,這種染色體是機(jī)體內(nèi)真實(shí)情況的反映,而且用骨髓制片的方法易于觀察毒性物質(zhì)在體內(nèi)對(duì)細(xì)胞和染色體的影響。實(shí)驗(yàn)方法和步驟:(一)秋水仙素處理取骨髓前3
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的三個(gè)常見小問題2024/01/18
三個(gè)常見小問題:細(xì)胞培養(yǎng)用的培養(yǎng)基是不是必須加雙抗?血清在使用之前是不是一定要滅活?往培養(yǎng)基里加細(xì)胞因子又是什么操作?要不要加雙抗?在培養(yǎng)基中添加抗生素是一種常見的操作,其主要作用是抑制或殺死培養(yǎng)物中的某些細(xì)菌或真菌,從而避免它們對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的干擾和污染。在培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,選擇適當(dāng)濃度和種類的抗生素,可以有效地消除或減少雜菌、污染菌或其他不需要的微生物,保證培養(yǎng)物的純度和穩(wěn)定性。同時(shí),添加抗生素還可以用來(lái)篩選或檢測(cè)耐藥性菌株,評(píng)估其對(duì)抗生素的敏感性和耐受性。但是,添加抗生素并不能確保你的細(xì)胞一定不被微
ibidi 載玻片|優(yōu)化活細(xì)胞培養(yǎng)2024/01/18
簡(jiǎn)介:免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法用小玻片,先泡酸、再晾干、再coating、再種細(xì)胞、染色、封片成像。本文章使用新方法,我們將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細(xì)胞(Rat1)的單個(gè)實(shí)驗(yàn)案例。然后,我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架,并用DAPI對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染。實(shí)驗(yàn)步驟:培養(yǎng),固定,染色,成像培養(yǎng):1.在無(wú)菌條件下打開ibidiμ-Slide并將其放在μ-Slide架(80003)上。將Rat1細(xì)胞懸浮液加
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)原代培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)2024/01/17
簡(jiǎn)介:BMSCs即為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,是骨髓中基質(zhì)細(xì)胞,是骨髓的支持結(jié)構(gòu),并可作為滋養(yǎng)層支持骨髓中造血干細(xì)胞的生長(zhǎng),因此也被稱為骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。作為干細(xì)胞的一種,它同樣具有多向分化潛能,在一定的環(huán)境和細(xì)胞因子的作用下,可被誘導(dǎo)分化為骨細(xì)胞、神經(jīng)元樣細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞等。其可被定義為具有多分化能力并且能自我更新復(fù)制的骨髓間質(zhì)細(xì)胞。其各項(xiàng)優(yōu)點(diǎn),使得它在臨床干細(xì)胞移植治療中顯示出極大的應(yīng)用場(chǎng)景。目前已廣泛使用在修復(fù)軟骨損傷、神經(jīng)細(xì)胞再生等領(lǐng)域。材料與儀器:燒杯、眼科剪、鑷子、紗布、巴氏
貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞如何傳代?2024/01/17
1.貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4mlPBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察,待細(xì)胞變圓,細(xì)胞間隙明顯,部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁,加4ml左右(血清)細(xì)胞培養(yǎng)液混勻終止消化,將細(xì)胞小心吹打下來(lái),1000rpm/min室溫離心5min;棄上清,細(xì)胞沉淀用(血清)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6ml,37℃、5
CO-IP實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)2024/01/16
原理:CO-IP(免疫共沉淀)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。從原理示意圖可見,免疫共沉淀利用抗原(紅三角)與蛋白(藍(lán)圓柱)的特異性結(jié)合,再通過連接著樹脂的抗體(紫圓球)去識(shí)別抗原,從細(xì)胞裂解液或者蛋白混合物中捕獲與抗原相作的蛋白。之后通過進(jìn)一步洗脫,獲取抗原-蛋白復(fù)合物,再對(duì)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。一、蛋白樣品制備裂解提取出免疫沉淀需要的蛋白樣品,以下為HEK293T細(xì)胞樣品的處理方法,其余的樣品
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