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深圳市安培生物科技有限公司
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什么是基因編輯技術?(上)2024/06/05
一、前言每一個生命個體都是由無數(shù)精妙的生物分子共同組成的。而其中的DNA就像是生命的藍圖,DNA中的每一段特定序列,即我們所稱的基因,各自承擔著特定的生物學功能。它們共同調控著生物體的生長、發(fā)育、繁殖等一系列復雜的生命過程。然而,并非所有基因都是十全十美的,有時候,基因中的一點小小改變,就可能導致疾病的產生。但如果我們能夠像編輯文字一樣編輯這些基因,那我們就有可能修復這些錯誤,治療疾病,甚至創(chuàng)造出新的生命形式。這個想法并非遙不可及。在21世紀的今天,一種名為"基因編輯"的技術正在逐漸實現(xiàn)這個夢想
石蠟切片HE染色實驗2024/06/04
蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-Eosinstaining),簡稱HE染色法,切片技術里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使用細胞核內的染色質與胞質內的核糖著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。實驗步驟:1.取樣固定取新鮮的組織樣品,加入4%多聚甲醛組織固定液的EP管中。取樣材料應該小而薄,約黃豆粒大小。2.脫水采用梯度酒精濃度法脫水。通常選擇50%-60%-70%-90%-95%-100%的濃度梯度,各酒精濃度要求準確,95%以前各步驟脫水1h,9
質粒電泳3條帶?5條帶?一文告訴你原因2024/06/04
1.相信很多小伙伴將質粒電泳后發(fā)現(xiàn),質粒不是單一條帶,而是出現(xiàn)了很多條帶,例如下圖:2.質粒為什么出現(xiàn)這樣的情況?一般理解來說,質粒DNA應如圖2(左)所示的簡單環(huán)狀結構。然而,雙鏈環(huán)狀DNA的分子軸變形或雙螺旋的扭曲,導致閉合環(huán)狀DNA中每個螺旋轉彎的實際堿基對數(shù)量發(fā)生變化,或者導致螺旋軸發(fā)生規(guī)則的空間變形,產生拓撲結構,形成質粒DNA的超螺旋性狀(圖2右)。因此,不同的拓撲結構將使質粒DNA形成多種形式,包括共價封閉圓形(CCC)形式、開放圓形(OC)形式(也稱為“缺口形式”)和線性形式(通
PCR凝膠電泳問題,全都總結出來了!2024/05/31
1.Marker相關問題1.1Marker不直,偏斜或拖尾原因:1.膠配制的問題,制作不均勻或有污染或瓊脂糖質量不好;2.電泳緩沖液過于老舊,考慮更換;3.電壓太高,凝膠受熱導致不均勻;4.電泳槽的電極歪斜;1.2Maker跑不開原因:1.膠濃度太大;2.電泳時間太短;2.PCR產物相關問題2.1沒條帶原因:沒跑出來2.2條帶微弱原因:1.DNA降解2.上樣量過少3.沒跑出來,產物濃度過低,需再次PCR2.3非特異性擴增原因:1.引物設計不合理。需重新設計引物,balst檢測引物特異性;2.試劑
瓊脂糖凝膠電泳實驗的注意事項2024/05/31
一、瓊脂糖凝膠的特點核酸分子是兩性解離分子,在高于其等電點的電泳緩沖液中,其堿基不解離,而磷酸基團全部解離,核酸分子因而帶負電荷,電泳時向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經糖基化修飾,為一種聚合鏈線性分子,使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質,發(fā)揮分子篩功能,使得大小和構象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異,從而達到分離的目的。因此,目前多用瓊脂糖為電泳支持物進行平板電泳,其優(yōu)點如下。(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。(2)瓊脂糖凝膠結構均勻,含水
上科大李磊組發(fā)現(xiàn)漸凍癥治療的新機制2024/05/29
5月11日,上海科技大學生命科學與技術學院李磊課題組在國際學術期《分子治療》發(fā)表了題為【TheMuSKagonistantibodyprotectstheneuromuscularjunctionandextendsthelifespaninC9orf72-ALSmice】的研究論文,報道了漸凍癥中神經肌肉接頭受損的新機制,并發(fā)現(xiàn)了一種治療的新策略。肌退化側索硬化癥(ALS),也被成為漸凍癥,是一種嚴重危及生命的運動神經系統(tǒng)疾病。患者由于上下運動神經元的退行和死亡,導致肌肉無力、麻痹和退化,最后
記憶真會刻進DNA阿!記憶導致DNA損傷再修復,難怪學習【燒腦】2024/05/29
長期以來,科學家一直致力于解開大腦如何存儲和回憶記憶的謎團。海馬體,作為大腦中負責處理記憶和空間導航的關鍵區(qū)域,一直是研究的熱點。近期,來自美國西北大學范伯格醫(yī)學院醫(yī)學系的研究人員在Nature正刊在線發(fā)表研究論文「FormationofmemoryassembliesthroughtheDNA-sensingTLR9pathway」。該研究發(fā)現(xiàn)學習和記憶形成時會刺激大腦神經元發(fā)生強烈的電活動,導致其DNA雙鏈斷裂。DNA損傷后,神經元中的特定信號通路被激活以修復DNA損傷。正是在神經元的DNA
復旦團隊復活冰封18個月的人腦,三體要成真了?2024/05/29
隨著類器官技術的進步,腦類器官在研究人類大腦發(fā)育、腦疾病建模和開發(fā)新藥方面顯示出巨大的潛力,腦類器官對于研究和模擬人類神經系統(tǒng)疾病至關重要。然而,腦類器官的培養(yǎng)周期長,成本高,極大限制了它們在生物醫(yī)學研究中的應用。攜帶病理特征的新鮮人腦組織是研究神經系統(tǒng)疾病更為可靠的模型。目前,具有特定病理特征的腦組織可獲取性,可操縱性以及低溫保存神經活性都面臨很多技術難題。冷凍保存技術已在胚胎干細胞、配子、胚胎、膠質母細胞瘤類器官、子宮內膜器官等方面廣泛應用,極大助力再生醫(yī)學的發(fā)展。腦類器官/腦組織是由多種神
無菌操作的注意事項(2)2024/05/28
我們這篇文章主要講述幾個常見實驗操作的注意事項。包括:擦拭、加蓋、灼燒、移液;01擦拭實驗過程中需要擦拭的對象有工作臺面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。對于工作臺面,在實驗開始前,結束后都需要試用70%乙醇擦拭,如果實驗過程中出現(xiàn)液體滴落在臺面,也需要擦拭臺面后才能繼續(xù)實驗;對于手套,除了佩戴一次性滅菌處理過的手套外,整個實驗過程都應間隔一段時間就擦拭手套一次;對于瓶皿/孔板,如果實驗過程中被拿出過生物安全柜范圍以外,那么再次放回生物安全柜或培養(yǎng)箱之前,都應該用70%乙醇進行外表面擦拭;
無菌操作的注意事項(1)2024/05/28
細胞培養(yǎng)需要無菌技術。什么是無菌技術?它和普通的實驗操作有什么區(qū)別?首先,無菌技術是通過制定一個嚴格的操作規(guī)范來約束每個人做實驗的行為規(guī)范,從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細胞之間建立起一道屏障。這道屏障有兩層含義:1.讓細胞從物理上和外部非無菌的物品隔絕,不讓它們直接接觸2.設計實驗操作時,所有步驟不能讓細胞和外部非無菌環(huán)境建立直接聯(lián)系說白了,就是從各個環(huán)節(jié)、細節(jié)上去盡力做到沒有過失。實驗操作臺面在生物安全柜內進行細胞培養(yǎng)操作,操作臺面的使用有以下注意事項:1用之前,無論
穩(wěn)定載體時,為什么載體上通常有兩個抗性基因?2024/05/28
構建的載體上有兩個抗性基因,但一般只有一個抗性用來篩細胞。兩個抗性基因的本質區(qū)別是什么呢?我們來看看這個例子,現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質粒的圖譜,載體上有兩個抗性基因,Amp(氨芐青霉素)和Neo(新霉素)。氨芐青霉素是在bla啟動子驅動下表達,bla是原核表達啟動子,在大腸桿菌可以表達,因此,轉化后的質粒用Amp可以篩選出來。而新霉素是在SV40啟動子驅動下表達,SV40是真核表達啟動子,轉入真核細胞后表達,所以只有轉進了載體的細胞才能被篩選出來。所以,穩(wěn)定轉染時,載體上的兩個抗性基因,一個
裸鼠皮下成瘤實驗2024/05/24
裸鼠皮下成瘤實驗用于研究腫瘤的形成、發(fā)展以及針對腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統(tǒng)的小鼠品種,因此能夠更容易地接受移植的異種組織,比如人類腫瘤細胞。在這種實驗中,通常會將人類腫瘤細胞注射到裸鼠的皮下組織中,形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長情況、病理學特征以及對治療方法的反應。此實驗通常用于評估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過在裸鼠模型中進行實驗,可以更好地理解腫瘤的生物學特性,并為臨床治療提供重要的參考依據(jù)。實驗步驟1.準備工作:準備對數(shù)期生長的、細胞密度達80-90%
真核表達系統(tǒng)有哪些?2024/05/24
有三種,分別是哺乳動物表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、昆蟲表達系統(tǒng)。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能誘導高效表達,對目的蛋白進行正確折疊,并進行復雜糖基化修飾,生產的蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內毒素,但是實驗周期較長,操作復雜,成本高。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的表達方式有兩種,瞬時轉染和構建穩(wěn)定轉染的細胞系,應用于不同的研究需求。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)是基因工程藥物的生產平臺,適用于新基因的發(fā)現(xiàn)、蛋白質結構和功能的研究,是真核系統(tǒng)中可以單獨表達復雜系統(tǒng)的蛋白。以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網站鏈接
共表達抗原的工作2024/05/23
抗原間的相互關系分為三種,分別是互斥關系、子代與親代的關系和共表達關系?;コ怅P系是指兩種抗原不會同時表達在一中細胞上,即表達A不表達B,表達B不表達A。配色時,互斥的抗原是允許熒光溢漏的。子代與親代關系是指抗原之間是上下級關系,即下級抗原是在上級抗原的基礎上進行分析的。共表達關系是指兩種抗原同時表達在一種細胞上。配色時,共表達抗原要搭配熒光干擾較小的熒光素,盡量避免熒光溢漏。什么樣的抗原屬于共表達抗原呢?以Treg細胞為例,Treg細胞同時表達CD25和Foxp3,那么CD25和Foxp3就屬于
經驗總結/實驗猿一定要注意的實驗室安全知識2024/05/23
一、基本實驗操作前做防護準備進入實驗室第一件事情:穿白大褂,戴手套,戴口罩!!!你壓根想不到下一秒被什么溶液潑濺到,touch到什么有毒物質或空氣中有什么懸浮/揮發(fā)性物質,且有些藥品(如:苯、有機溶劑、汞等)會透過皮膚進入人體。1.穿戴實驗服并扣上扣子:穿戴專門的實驗服可以防止實驗物質直接接觸到皮膚上,減少受到化學或生物物質的傷害。實驗服應該是長袖的,能夠全部覆蓋身體,并且易于清洗。2.戴手套:在進行生物實驗時,戴上手套可以保護雙手不受到細菌、病毒或其他有毒有害物質的侵害。手套應該是適合尺寸的,
瞬時轉染與穩(wěn)定轉染的本質區(qū)別是什么?2024/05/23
瞬時轉染是在短時間內獲得目的蛋白,而穩(wěn)定轉染是獲得能長期穩(wěn)定地生產目的蛋白的細胞株。瞬時轉染時,外源基因并沒有轉染到細胞的染色體上,而是存在于游離的載體上,可以在短時間(1-3天)內獲得基因的表達產物。但是隨著細胞的不斷分裂增殖,外源基因最終會丟失,無法繼續(xù)進行重組蛋白的生產。穩(wěn)定轉染是將外源基因轉染至細胞染色體上,目的基因不會隨著細胞傳代而消失,穩(wěn)定轉染的細胞株能夠長期穩(wěn)定地生產目的蛋白。另外,穩(wěn)定轉染還能夠進行基因插入、基因敲除等編輯操作。以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網站鏈
PCR引物設計原則2024/05/23
1、引物長度一般在15-30bp引物長度一般為15-30bp,常用的為18-27bp,但不應大于38bp,因為過長會導致其延伸溫度大于74°C,不適于TaqDNA聚合酶進行反應;2、引物GC含量一般為40%-60%引物GC含量一般為40%-60%,以45-55%為宜,GC含量為高或過低都不利于引發(fā)反應。上下游引物GC含量過高或過低都不利于引發(fā)反應。上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所對應的模版序列的Tm值最好在72°C左右Tm值在72°C左右可使復性條件最佳,至少要在55-80°C之
配膠注意事項!SDS-PAGE電泳2024/05/23
1、留意配膠試劑的有效期和清澈度,一旦發(fā)現(xiàn)沉淀或結晶,要及時更換。2、pH8.8Tris-HCL和pH6.8Tris-HCL可能會產生沉淀,根據(jù)需要選擇1.0M或1.5M的濃度。3、在4度下存放的10%SDS易結晶。30%丙烯酰胺需在避光的情況下存放在4度以下。APS容易失效,建議配制后分裝并冷凍保存在-20度。4、TEMED有刺鼻的氣味和揮發(fā)性,對神經有毒,使用時請在通風良好的環(huán)境下,并避免暴露在空氣中。5、插梳子時,可斜著插,以避免有氣泡的產生。6、注意防止膠條老化和干燥,注意電泳結束后,將
父親腸菌失調,或導致胎兒生長受限,早亡風險大增2024/05/20
人們常言,父愛如山。父親對孩子的愛猶如高山般深沉偉岸,他的性格品質、做事風格與思想觀念,潛移默化地影響后代,給予其滋養(yǎng)和勇氣。傳統(tǒng)觀念里,孩子出生前,母親與胎兒因心跳相連、呼吸共通,較之父親會更加親密,對孩子的生理影響似乎更加深入。然而,大量研究顯示,父親對于胎兒的影響超乎想象,其精子以遺傳(DNA序列)和表觀遺傳(非DNA序列)物質的形式將遺傳信息傳遞給下一代。父親攜帶的表觀遺傳信息,包括染色質狀態(tài)、小RNA和大分子等,均有可能被孕前環(huán)境改變,并影響后代的表現(xiàn),也就是說精子里不僅有遺傳密碼,還
大鼠急性/慢性肩袖損病模型的構建方法2024/05/20
一、背景介紹肩袖疾病的研究目標一般包含兩個層面:一是宏觀層面,如生物力學建模、優(yōu)化手術技術、評估新器械或設備等,這一類研究要求動物模型在結構和功能上與人高度相近,所以大動物模型,特別是非人靈長類動物模型,通常更為適合;二是微觀層面,如腱骨愈合的生物學特征、潛在的信號通路以及疾病的遺傳學機制,經驗證的小動物模型通常能滿足此類研究的需求。本次講解大鼠肩袖損傷模型的構建方法。大鼠模型適用于肩袖病理改變的研究。Soslowsky開發(fā)的大鼠模型具有與人相似的喙肩弓和過頭運動,特別適合于研究反復運動或撞擊引
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