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用    途：

         用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計(jì)數(shù)（GB/T16347-1996，GB/T4789.35-2003）。
 

 

原    理：
         番茄汁可提供碳源、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；葡萄糖和乳糖為可發(fā)酵糖類提供碳源；磷酸氫二鉀為緩沖劑；吐溫-80和乙酸鈉為培養(yǎng)各種乳酸菌提供生長(zhǎng)因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

 

配方（每升）：

          

酵母膏粉	5g
牛肉膏粉	10g
乳糖	20g
葡萄糖	2g
磷酸氫二鉀	2g
吐溫-80	1g
乙酸鈉	5g
瓊脂	15g

zui終pH 6.8±0.2

 

使用方法：
1、      切碎洗凈的新鮮番茄，放入三角瓶，置4℃冰箱8～12h，取出后用紗布過(guò)濾。稱取本品60g，加入950 ml蒸餾水或去離子水和50ml番茄汁，攪拌加熱煮沸至*溶解，校正pH后分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min。

2、      無(wú)菌操作將經(jīng)過(guò)充分搖勻的檢樣25g（或25mL），放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶?jī)?nèi)，振搖均勻，即為1：10稀釋液，依次做1：100、1：1000……稀釋。

3、      選擇2-3個(gè)合適的稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時(shí)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。將培養(yǎng)基涼至50℃左右，將培養(yǎng)基注入平皿中約15mL，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)72±3h。選擇菌落數(shù)在30-300個(gè)之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)后，隨機(jī)挑取5個(gè)菌落數(shù)進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)。革蘭氏陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶陰性，無(wú)芽孢的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據(jù)證實(shí)為乳酸菌落計(jì)算出該皿內(nèi)的乳酸數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)即得每毫升樣品中乳酸菌數(shù)。例如，檢樣10-4的稀釋液在改良TJA培養(yǎng)基平板上，生成的可疑菌落為35個(gè)，取5個(gè)鑒定，證實(shí)為乳酸菌的是4個(gè)，則1 mL檢樣中乳酸菌數(shù)為：

4、

               35× — ×104＝2.8×105

                    5

質(zhì)量控制：

          下列菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)72h結(jié)果如下：

菌    名	菌    號(hào)	生長(zhǎng)狀況	生長(zhǎng)特征
保加利亞乳桿菌	As1.1482	良好	平皿底為黃色，菌落中等大小，微白色，濕潤(rùn)，邊緣不整齊，直徑3±1mm，如棉絮團(tuán)狀菌落
乳鏈球菌		良好	平皿底為黃色，菌落光滑，微白色，濕潤(rùn)，邊緣整齊

　　

貯    存：貯存于避光、陰涼干燥處。