EL-S1猞猁皮膚細(xì)胞系
EL-S1猞猁皮膚細(xì)胞系在貓科動(dòng)物皮膚生物學(xué)研究領(lǐng)域占據(jù)重要地位，為深入探究猞猁皮膚細(xì)胞的特性與功能提供了可靠的體外研究工具，助力科研人員剖析貓科動(dòng)物皮膚的奧秘。
猞猁作為一種分布于寒溫帶及亞寒帶的貓科動(dòng)物，其皮膚在抵御低溫、機(jī)械損傷以及適應(yīng)復(fù)雜環(huán)境等方面發(fā)揮著重要作用。皮膚細(xì)胞作為皮膚結(jié)構(gòu)與功能的基本單位，其特性與猞猁的生存適應(yīng)性緊密相連。以往對(duì)貓科動(dòng)物皮膚的研究多依賴整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，難以在細(xì)胞層面精準(zhǔn)解析皮膚的生理與病理機(jī)制。原代皮膚細(xì)胞培養(yǎng)存在存活時(shí)間短、傳代困難等問(wèn)題，限制了相關(guān)研究的深入開(kāi)展。因此，EL-S1 猞猁皮膚細(xì)胞系的建立，為突破這些研究瓶頸帶來(lái)了新的契機(jī)。
EL-S1 猞猁皮膚細(xì)胞系來(lái)源于一只雄性猞猁的皮膚組織，由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)于 2000 年成功建立。建立過(guò)程嚴(yán)格遵循細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范，在無(wú)菌條件下獲取猞猁皮膚組織，仔細(xì)去除皮下脂肪、血管及結(jié)締組織，將剩余的皮膚組zhi剪切成約 1mm3 的小塊。隨后，用含雙抗的磷酸鹽緩沖液多次沖洗，以徹di清除血液和雜質(zhì)。接著，加入專用皮膚細(xì)胞分散液，在 37℃的環(huán)境中處理 35 - 45 分鐘，期間每隔 10 分鐘輕柔吹打，促使細(xì)胞充分分散。收集細(xì)胞懸液后，經(jīng) 70μm 細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾，再以 1000r/min 的轉(zhuǎn)速離心 8 分鐘，棄去上清液，用含有 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并接種于培養(yǎng)瓶中，放置在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行原代培養(yǎng)。在培養(yǎng)初期，每天更換培養(yǎng)液以去除非貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 80% 左右時(shí)進(jìn)行傳代操作。目前，該細(xì)胞系已穩(wěn)定傳代至 40 代以上，細(xì)胞活力始終保持在 85% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的成纖維樣形態(tài)，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，胞體細(xì)長(zhǎng)且均勻，多呈平行狀或網(wǎng)狀緊密排列，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，具有較強(qiáng)的貼壁生長(zhǎng)特性。在生長(zhǎng)特性方面，研究發(fā)現(xiàn) EL-S1 細(xì)胞在 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長(zhǎng)狀態(tài)最為理想，相較于其他培養(yǎng)液，其細(xì)胞增殖速度提高約 20%。最適宜的培養(yǎng)溫度為 37℃，與哺乳動(dòng)物體溫一致；當(dāng)胎牛血清濃度為 10% 時(shí)，細(xì)胞群體倍增時(shí)間最短，約為 65 小時(shí)。歷經(jīng) 35 代傳代后，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率未出現(xiàn)明顯變化，核型分析顯示其染色體數(shù)目穩(wěn)定，維持猞猁正常的 38 條染色體，遺傳背景可靠，穩(wěn)定保留了皮膚細(xì)胞的固有特性。
在功能特性方面，免疫熒光檢測(cè)清晰顯示，EL-S1 細(xì)胞高表達(dá)成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物，如波形蛋白、Ⅰ 型膠原蛋白，確鑿證實(shí)了其皮膚成纖維細(xì)胞屬性。該細(xì)胞系具備較強(qiáng)的膠原合成能力，培養(yǎng)液中 Ⅰ 型膠原蛋白含量較高，對(duì)維持皮膚的結(jié)構(gòu)完整性和彈性起著關(guān)鍵作用。當(dāng) EL-S1 細(xì)胞受到紫外線照射刺激時(shí)，抗氧化相關(guān)基因如 SOD1 的表達(dá)量顯著上調(diào)，展現(xiàn)出良好的應(yīng)激適應(yīng)能力，為研究猞猁皮膚抵御紫外線損傷的機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。此外，該細(xì)胞系對(duì)常見(jiàn)的細(xì)菌病原體如金黃色pu萄球菌表現(xiàn)出敏感性，感染后細(xì)胞活力下降，炎癥因子分泌增加，為深入探究病原體與皮膚細(xì)胞的相互作用機(jī)制提供了良好的實(shí)驗(yàn)材料。
EL-S1 猞猁皮膚細(xì)胞系在多個(gè)研究領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用價(jià)值。在皮膚發(fā)育研究中，通過(guò)對(duì)該細(xì)胞系進(jìn)行基因敲除實(shí)驗(yàn)，成功揭示了 TGF-β1 基因在猞猁皮膚成纖維細(xì)胞分化過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控作用。在比較生理學(xué)研究方面，借助該細(xì)胞系與其他貓科動(dòng)物皮膚細(xì)胞系的對(duì)比分析，清晰闡明了不同貓科動(dòng)物皮膚功能的差異及其調(diào)控機(jī)制。在獸醫(yī)臨床研究領(lǐng)域，基于該細(xì)胞系建立的藥物篩選模型，已用于評(píng)估多種治療皮膚炎癥藥物對(duì)猞猁皮膚細(xì)胞的保護(hù)效果，為猞猁皮膚疾病的防治提供了有力支持。
作為穩(wěn)定可靠的猞猁皮膚細(xì)胞模型，EL-S1 不僅為貓科動(dòng)物皮膚生物學(xué)研究提供了重要的技術(shù)支撐，推動(dòng)了相關(guān)學(xué)術(shù)研究的深入發(fā)展，還有助于提升對(duì)猞猁等珍xi貓科動(dòng)物的保護(hù)水平，為保護(hù)生物學(xué)領(lǐng)域的研究貢獻(xiàn)重要力量。
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