目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1339BHK/slam/v倉鼠腎細胞系
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來源與構(gòu)建:該細胞系以 BHK-21(幼倉鼠腎細胞)為親本,通過慢病毒載體介導將犬源或人源 SLAM 基因?qū)爰毎蚪M,經(jīng) G418 抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株,“slam/v" 標識其表達的 SLAM 受體及病毒敏感性特征。構(gòu)建過程中采用 EF1α 啟動子驅(qū)動表達,結(jié)合 kozak 序列優(yōu)化翻譯起始效率,使 SLAM 受體膜定位率達 90% 以上,顯著提升病毒結(jié)合效率。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型成纖維樣形態(tài),貼壁生長,細胞呈長梭形,排列疏松,邊界清晰,核質(zhì)比適中,形態(tài)與親本 BHK-21 細胞一致。在 37℃、5% CO?條件下,增殖速度快,傳代周期約 18-24 小時,可適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,傳代 50 次以上仍能維持 SLAM 高表達(表達量為親本細胞的 30-40 倍),病毒敏感性無明顯衰減,優(yōu)于瞬時轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。
表達特征:SLAM 為 I 型跨膜糖蛋白,膜表達量達(2.5-3.0)×10?分子 / 細胞(流式細胞術(shù)檢測),對副黏病毒科病毒(如犬瘟熱病毒、麻疹病毒)的親和力高(解離常數(shù) Kd≈3×10?? M)。其胞外域可特異性結(jié)合病毒血凝素蛋白,介導病毒包膜與細胞膜融合,顯著提升病毒入侵效率(感染滴度比親本 BHK-21 細胞高 10-100 倍),且支持病毒完整復制周期(從吸附到釋放約 48-72 小時)。
SLAM 介導的病毒感染機制研究
病毒疫苗開發(fā)與生產(chǎn)
抗病du藥物篩選與評估
優(yōu)勢:SLAM 受體表達穩(wěn)定,長期傳代后病毒敏感性波動<10%,實驗重復性優(yōu)于原代細胞;增殖速度快于 CHO 等細胞系,病毒培養(yǎng)周期縮短 30%-40%,適合高通量實驗;兼容貼壁與懸浮培養(yǎng),可實現(xiàn)從實驗室研究到工業(yè)化生產(chǎn)的無縫銜接;對多種 SLAM 依賴型病毒敏感,適用范圍覆蓋犬瘟熱、麻疹、牛瘟等重要病毒,應(yīng)用價值廣泛。
局限性:SLAM 表達可能受培養(yǎng)條件影響(如血清濃度),需嚴格控制培養(yǎng)參數(shù);作為倉鼠細胞,與人源 SLAM 存在物種差異,部分人病毒研究需結(jié)合人源細胞驗證;對非 SLAM 依賴型病毒敏感性低,應(yīng)用范圍存在局限。
培養(yǎng)條件:常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,添加 400μg/mL G418 維持抗性篩選,37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中生長良好。傳代時控制融合度在 60%-70%,采用溫和方法分離細胞,避免過度處理影響受體表達。懸浮培養(yǎng)可采用無血清培養(yǎng)基逐步馴化,最終細胞密度可達 5×10?個 /mL,病毒產(chǎn)量無明顯下降。
質(zhì)控與安全:定期通過流式細胞術(shù)檢測 SLAM 膜表達量,病毒感染實驗驗證敏感性;STR 鑒定確保細胞純度,支原體檢測需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,液氮保存可維持活性 5 年以上,復蘇后傳代 2 次待狀態(tài)穩(wěn)定后再用于實驗,涉及高致病性病毒時需在相應(yīng)生物安全實驗室操作。
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