目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1399Vero E6-S非洲綠猴腎細(xì)胞懸浮適應(yīng)株細(xì)胞系
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更新時(shí)間：2025-07-27 18:23:54瀏覽次數(shù)：381評(píng)價(jià)
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來源與適應(yīng)機(jī)制
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
病毒敏感性：保留對(duì)冠狀病毒的高易感性，感染 SARS-CoV-2 后 48 小時(shí)病毒滴度達(dá) 10? TCID??/mL，與貼壁 Vero E6 細(xì)胞相當(dāng)；對(duì)中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）、寨卡病毒等也具有敏感性，滴度較貼壁培養(yǎng)提升 10%-15%。
受體表達(dá)：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 2（ACE2）表達(dá)量達(dá) 9×10?分子 / 細(xì)胞（流式檢測(cè)），與貼壁細(xì)胞無顯著差異，為冠狀病毒入侵提供充足受體。
代謝特性：葡萄糖消耗速率為 25 mg/10? cells / 天，乳酸積累量較貼壁細(xì)胞降低 25%，更適合高密度長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)。
冠狀病毒疫苗生產(chǎn)
滅活疫苗規(guī)?；a(chǎn)：在 1000L 攪拌式生物反應(yīng)器中，Vero E6-S 細(xì)胞密度達(dá) 3×10? cells/mL，SARS-CoV-2 病毒滴度穩(wěn)定在 10?.? TCID??/mL，單批次病毒產(chǎn)量達(dá) 3×1011 TCID??，可生產(chǎn) 3000 萬劑滅活疫苗，較轉(zhuǎn)瓶工藝效率提升 15 倍，生產(chǎn)成本降低 50%。疫苗中宿主細(xì)胞蛋白殘留量＜30ng / 劑，符合 WHO 標(biāo)準(zhǔn)。
病毒樣顆粒（VLP）表達(dá)：作為重組桿狀病毒的宿主細(xì)胞，可高效表達(dá)冠狀病毒 S 蛋白 VLP，產(chǎn)量達(dá) 5μg/10? cells，純度超 90%，免疫小鼠后中和抗體效價(jià)達(dá) 1:1280，為亞單位疫苗研發(fā)提供低成本生產(chǎn)平臺(tái)。
病毒學(xué)研究與藥物篩選
病毒復(fù)制動(dòng)力學(xué)研究：利用懸浮培養(yǎng)的均一性，精準(zhǔn)測(cè)定 SARS-CoV-2 復(fù)制參數(shù)：潛伏期 8-10 小時(shí)，對(duì)數(shù)期 12-24 小時(shí)，平臺(tái)期 24-48 小時(shí)，為優(yōu)化疫苗生產(chǎn)工藝提供數(shù)據(jù)支撐。
高通量藥物篩選：在 96 孔懸浮培養(yǎng)板中，可同時(shí)檢測(cè) 200 種以上化合物的抗病毒活性，篩選效率較貼壁培養(yǎng)提升 4 倍。例如，通過該模型篩選出的 3CL 蛋白酶抑制劑，對(duì) SARS-CoV-2 的 EC??=1.2μM，與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致性達(dá) 0.90。
診斷試劑研發(fā)
抗原制備：大量培養(yǎng)的病毒可用于制備冠狀病毒診斷抗原，如 S 蛋白與 N 蛋白，ELISA 試劑盒敏感性達(dá) 98%，特異性＞99%，較傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)抗原批間差異降低 60%。
中和抗體檢測(cè)：作為病毒中和實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，其懸浮培養(yǎng)的均一性使檢測(cè)變異系數(shù)＜5%，結(jié)果穩(wěn)定性顯著優(yōu)于貼壁細(xì)胞，已被納入多個(gè)國家的新guan疫苗臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：無血清 SFM 培養(yǎng)基添加 4mM 谷an酰胺、0.1% Pluronic F-68，pH 維持在 7.2-7.4，每日監(jiān)測(cè)溶氧（維持 30%-50%）與葡萄糖濃度（＞1.5g/L）。
傳代流程：取對(duì)數(shù)期細(xì)胞懸液，1200rpm 離心 5 分鐘，棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸，按初始密度 8×10? cells/mL 接種至搖瓶（轉(zhuǎn)速 110rpm），避免細(xì)胞團(tuán)過大（＞200μm）導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不均。
凍存保護(hù)：取密度 2×10? cells/mL 的細(xì)胞，加入含 10% DMSO 的凍存液（SFM 培養(yǎng)基配制），程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴解凍，直接接種至預(yù)熱培養(yǎng)基（無需離心洗滌）。
病毒培養(yǎng)與放大
冠狀病毒接種：細(xì)胞密度達(dá) 2×10? cells/mL 時(shí)，按 MOI=0.05 加入病毒液，37℃培養(yǎng)，感染后 24 小時(shí)補(bǔ)加 50% 體積新鮮培養(yǎng)基，48-72 小時(shí)收獲病毒液，通過 0.45μm 濾膜澄清。
生物反應(yīng)器控制：采用 pH-stat 補(bǔ)料策略，當(dāng) pH＞7.3 時(shí)補(bǔ)加葡萄糖溶液（500g/L），維持代謝穩(wěn)定，可延長(zhǎng)病毒復(fù)制期 12 小時(shí)，滴度提升 20%。
優(yōu)勢(shì)：
規(guī)?；a(chǎn)能力：懸浮培養(yǎng)可通過生物反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)大規(guī)模擴(kuò)增，單批次產(chǎn)量滿足千wan級(jí)疫苗需求，適合突發(fā)疫情應(yīng)急生產(chǎn)。
工藝穩(wěn)定性：細(xì)胞生長(zhǎng)與病毒復(fù)制均一性高，批間差異＜8%，便于質(zhì)量控制與工藝驗(yàn)證。
成本效益：較貼壁培養(yǎng)減少 90% 的培養(yǎng)面積需求，人力成本降低 60%，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
局限性：
培養(yǎng)基成本：無血清 SFM 培養(yǎng)基價(jià)格為傳統(tǒng)培養(yǎng)基的 4 倍，初期投入較高。
技術(shù)門檻：需掌握懸浮細(xì)胞計(jì)數(shù)、反應(yīng)器參數(shù)調(diào)控等技能，對(duì)操作人員要求嚴(yán)格。
病毒譜局限：主要適用于冠狀病毒等少數(shù)病毒，對(duì)其他病毒支持能力有限。
Vero E6-S 懸浮適應(yīng)株的建立推動(dòng)了冠狀病毒疫苗生產(chǎn)技術(shù)的革新，其在新guan疫苗研發(fā)中的應(yīng)用，使全qiu首支滅活疫苗快速實(shí)現(xiàn)規(guī)模化供應(yīng)，為疫情防控提供關(guān)鍵支撐。技術(shù)層面，其馴化策略為其他貼壁細(xì)胞的懸浮改造提供了范式，已成功應(yīng)用于 MDCK、HEK293 等細(xì)胞系。未來，通過基因編輯過表達(dá) ACE2 與 TMPRSS2，有望進(jìn)一步提升病毒產(chǎn)量；結(jié)合連續(xù)灌流培養(yǎng)技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)病毒的連續(xù)生產(chǎn)，推動(dòng)疫苗生產(chǎn)向智能化、高效化發(fā)展。
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