來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 細(xì)胞為親本，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將含人 CD14 基因的表達(dá)載體（含 CMV 啟動(dòng)子與新mei素抗性基因）導(dǎo)入細(xì)胞，經(jīng) G418 篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株?！癈D14" 明確標(biāo)識(shí)其表達(dá)的功能分子，與普通 CHO-K1 細(xì)胞形成顯著區(qū)分。其保留卵巢上皮樣細(xì)胞的基本形態(tài)，同時(shí)因 CD14 表達(dá)呈現(xiàn)特異性功能特征：可通過 CD14 識(shí)別脂多糖（LPS）等配體，激活下游 TLR4/NF-κB 信號(hào)通路，模擬天然免疫細(xì)胞的模式識(shí)別功能。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞呈多邊形，排列規(guī)則，邊界清晰，核質(zhì)比正常。在 37℃、5% CO?條件下，增殖穩(wěn)定，傳代周期約 24-30 小時(shí)，可適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，無需特殊生長(zhǎng)因子，傳代 60 次以上仍能維持 CD14 高表達(dá)（表達(dá)量為親本細(xì)胞的 20-30 倍），功能活性無明顯衰減，顯著優(yōu)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。

表達(dá)特征：CD14 分子主要定位于細(xì)胞膜（通過免疫熒光驗(yàn)證），少量存在于胞質(zhì)中，表達(dá)量達(dá)（1.2-1.8）×10?分子 / 細(xì)胞（流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)）。該分子保留天然構(gòu)象，能特異性結(jié)合 LPS（解離常數(shù) Kd≈5×10?? M），并介導(dǎo) LPS 誘導(dǎo)的 NF-κB 核轉(zhuǎn)位及 IL-6、TNF-α 等炎癥因子分泌（ELISA 檢測(cè)顯示分泌量隨 LPS 濃度升高而增加），功能活性接近人單核細(xì)胞來源的 CD14。

優(yōu)勢(shì)：CD14 表達(dá)量高且穩(wěn)定，長(zhǎng)期傳代后功能活性波動(dòng)＜10%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性優(yōu)于原代細(xì)胞；遺傳背景清晰，與 CHO-K1 細(xì)胞同源性高，便于通過親本對(duì)照排除非特異性效應(yīng)；可同時(shí)表達(dá) CD14 及共受體（如 TLR4），完整模擬天然信號(hào)傳導(dǎo)環(huán)境，功能更接近體內(nèi)狀態(tài)；培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，兼容貼壁與懸浮培養(yǎng)，適合大規(guī)模藥物篩選。

局限性：作為倉(cāng)鼠細(xì)胞，CD14 下游信號(hào)分子的物種差異可能導(dǎo)致部分通路激活效率與人類細(xì)胞不同；缺乏天然免疫細(xì)胞的其他模式識(shí)別受體，無法wan全模擬復(fù)雜的免疫微環(huán)境；高表達(dá) CD14 可能導(dǎo)致細(xì)胞對(duì) LPS 過度敏感，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格控制配體濃度。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，添加 G418（400μg/mL）維持抗性篩選，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)良好。傳代時(shí)控制融合度在 70%-80%，采用溫和消化方法分離細(xì)胞，避免機(jī)械損傷影響 CD14 表達(dá)。進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議使用無血清培養(yǎng)基饑餓處理 12-24 小時(shí)，減少血清成分對(duì)信號(hào)通路的干擾。

質(zhì)控與安全：定期通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) CD14 膜表達(dá)量，Western blot 驗(yàn)證蛋白完整性；STR 鑒定確保細(xì)胞純度，避免交叉污染。因涉及 LPS 等生物試劑，操作需符合生物安全二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，液氮保存可維持活性 5 年以上。