TS-L3樹(shù)鼩肺細(xì)胞系
TS-L3樹(shù)鼩肺細(xì)胞系在樹(shù)鼩肺臟生物學(xué)研究領(lǐng)域占據(jù)重要地位，為深入探究樹(shù)鼩肺細(xì)胞的特性與功能提供了可靠的體外研究工具，助力科研人員剖析樹(shù)鼩肺臟的生理與病理機(jī)制。
樹(shù)鼩作為進(jìn)化上接近靈長(zhǎng)類的小型哺乳動(dòng)物，其肺臟在氣體交換、防御病原體入侵以及維持呼吸功能穩(wěn)定等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。肺細(xì)胞作為肺臟結(jié)構(gòu)與功能的基本單位，其生理特性與樹(shù)鼩的生存適應(yīng)和健康狀態(tài)緊密相關(guān)。以往對(duì)樹(shù)鼩肺臟的研究多依賴整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，難以在細(xì)胞層面精準(zhǔn)解析肺臟的呼吸調(diào)節(jié)規(guī)律和疾病發(fā)生機(jī)制。原代肺細(xì)胞培養(yǎng)存在存活周期短、功能穩(wěn)定性差、傳代受限等問(wèn)題，制約了相關(guān)研究的深入開(kāi)展。因此，TS-L3 樹(shù)鼩肺細(xì)胞系的建立，為突破這些研究瓶頸提供了新的解決方案。
TS-L3 樹(shù)鼩肺細(xì)胞系來(lái)源于樹(shù)鼩的肺組織，通過(guò)常規(guī)原代培養(yǎng)方法建立而成。建立過(guò)程嚴(yán)格遵循細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范，在無(wú)菌條件下獲取樹(shù)鼩肺臟組織，仔細(xì)剝離肺被膜、結(jié)締組織和血管，選取肺實(shí)質(zhì)部分，將組zhi剪切成約 1mm3 的小塊。隨后，用含雙抗的磷酸鹽緩沖液多次沖洗，徹di清除血液和雜質(zhì)。接著，加入專用肺細(xì)胞分散液，在 37℃環(huán)境中處理 30-40 分鐘，期間每隔 10 分鐘輕柔吹打，促使細(xì)胞充分分散。收集細(xì)胞懸液后，經(jīng) 70μm 細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾，再以 1000r/min 的轉(zhuǎn)速離心 8 分鐘，棄去上清液，用含有 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中，放置在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，每 24 小時(shí)更換培養(yǎng)液以去除非貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 80% 左右時(shí)進(jìn)行傳代操作。目前，該細(xì)胞系已穩(wěn)定傳代至 45 代以上，細(xì)胞活力始終保持在 85% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的上皮樣形態(tài)，細(xì)胞呈多邊形或短梭形，胞體飽滿，排列緊密呈單層片狀，胞質(zhì)豐富且含有細(xì)小空泡，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，具有較強(qiáng)的貼壁生長(zhǎng)特性。在生長(zhǎng)特性方面，研究發(fā)現(xiàn) TS-L3 細(xì)胞在 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長(zhǎng)狀態(tài)最佳，相較于其他培養(yǎng)液，細(xì)胞增殖速度提高約 20%。最適宜的培養(yǎng)溫度為 37℃，與多數(shù)哺乳動(dòng)物體溫一致；當(dāng)胎牛血清濃度為 10% 時(shí)，細(xì)胞群體倍增時(shí)間最短，約為 58 小時(shí)。歷經(jīng) 35 代傳代后，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率未出現(xiàn)明顯變化，核型分析顯示其染色體數(shù)目穩(wěn)定，維持樹(shù)鼩正常的染色體數(shù)目，遺傳背景可靠，穩(wěn)定保留了肺細(xì)胞的固有特性。
在功能特性方面，免疫熒光檢測(cè)清晰顯示，TS-L3 細(xì)胞高表達(dá)肺上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物，如細(xì)胞角蛋白 19、表面活性蛋白 C，確鑿證實(shí)了其肺上皮細(xì)胞屬性。該細(xì)胞系具備一定的氣體交換相關(guān)功能，能參與氧氣攝取和二氧化碳排出 的模擬過(guò)程，在維持細(xì)胞內(nèi)外氣體平衡中發(fā)揮著重要作用。當(dāng) TS-L3 細(xì)胞受到脂多糖刺激時(shí)，炎癥相關(guān)基因如 TLR4 的表達(dá)量顯著上調(diào)，展現(xiàn)出良好的應(yīng)激響應(yīng)能力，為研究樹(shù)鼩肺臟的免疫防御機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。此外，該細(xì)胞系對(duì)常見(jiàn)的呼吸道病原體表現(xiàn)出敏感性，感染后細(xì)胞活力下降，炎癥因子如 TNF-α、IL-8 的分泌量增加，為探究病原體與肺細(xì)胞的相互作用機(jī)制提供了良好的實(shí)驗(yàn)材料。
TS-L3 樹(shù)鼩肺細(xì)胞系在多個(gè)研究領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用價(jià)值。在肺臟發(fā)育研究中，通過(guò)對(duì)該細(xì)胞系進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)，成功揭示了 FOXA2 基因在樹(shù)鼩肺上皮細(xì)胞分化過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控作用。在比較生理學(xué)研究方面，借助該細(xì)胞系與其他動(dòng)物肺細(xì)胞系的對(duì)比分析，清晰闡明了不同物種肺臟呼吸功能的差異及其調(diào)控機(jī)制。在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，基于該細(xì)胞系建立的藥物篩選模型，已用于評(píng)估多種抗肺部疾病藥物的療效和毒性，為肺部疾病的藥物研發(fā)提供了有力支持。
作為穩(wěn)定可靠的樹(shù)鼩肺細(xì)胞模型，TS-L3 不僅為樹(shù)鼩肺臟生物學(xué)研究提供了重要的技術(shù)支撐，推動(dòng)了相關(guān)學(xué)術(shù)研究的深入發(fā)展，還有助于提升對(duì)樹(shù)鼩這種模式生物的研究水平，為人類肺部疾病的研究和治療提供了有價(jià)值的參考，在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用領(lǐng)域均具有重要意義。
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