目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1450SSC-S2小香豬皮膚細(xì)胞系
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
皮膚特異性標(biāo)志物與人類同源性:高表達(dá)與人類同源的皮膚標(biāo)志物,如 Ⅲ 型膠原蛋白(ColⅢ,陽性率 97%)—— 其含量占總膠原的 25%(SSC-S1 為 10%,更接近人類皮膚的 30%),透明質(zhì)酸分泌量達(dá) 12μg/10?細(xì)胞 / 天(顯著高于 SSC-S1 的 8μg),與人類皮膚的保濕能力更接近;同時表達(dá)人類皮膚相關(guān) miRNA(如 miR-29a),表達(dá)譜與人類皮膚成纖維細(xì)胞的一致性達(dá) 78%(SSC-S1 為 62%)。
異種相容性特征:低表達(dá)豬特異性抗原 α-Gal(陽性率 5%,SSC-S1 為 30%),補體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)反應(yīng)率僅 12%(SSC-S1 為 45%),顯著降低異種移植的免疫排斥風(fēng)險;體外與人外周血單核細(xì)胞共培養(yǎng)時,促炎因子 TNF-α 分泌量較 SSC-S1 減少 60%,體現(xiàn)更好的免疫相容性。
病毒敏感性譜:對人類皮膚病毒(如單純皰疹病毒 HSV-1)的感染效率達(dá) 85%(SSC-S1 僅 30%),病毒滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL;對豬痘病毒的敏感性稍低于 SSC-S1(滴度 10?.? TCID??/mL),但對口蹄疫病毒皮膚亞型的敏感性與 SSC-S1 相當(dāng),展現(xiàn)跨物種病毒研究價值。
人類皮膚病模型構(gòu)建
燒傷修復(fù)機制研究:利用 SSC-S2 構(gòu)建的三維皮膚模型,燒傷后 IL-6 分泌量達(dá) 280pg/mL(與人類燒傷組織的 295pg/mL 高度接近,SSC-S1 模型為 180pg/mL),且血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)模式與人類燒傷修復(fù)過程一致性達(dá) 82%,為解析人類燒傷愈合機制提供更精準(zhǔn)的模型。
特應(yīng)性皮炎模擬:在塵螨提取物刺激下,該細(xì)胞系的絲聚蛋白表達(dá)量下降 45%(SSC-S1 下降 25%),Th2 型細(xì)胞因子 IL-4 分泌量達(dá) 150pg/mL(更接近人類患者的 160pg/mL),成為特應(yīng)性皮炎藥物篩選的優(yōu)選模型。
皮膚異種移植研究
移植排斥機制解析:通過 SSC-S2 與人類皮膚的異種移植模型,發(fā)現(xiàn) α-Gal 低表達(dá)可使移植后 14 天的皮膚存活率提升至 60%(SSC-S1 僅 20%),且 CD4?T 細(xì)胞浸潤減少 50%,為開發(fā)異種移植免疫抑制劑提供依據(jù);該模型的排斥反應(yīng)病理特征與人類臨床病例一致性達(dá) 80%,遠(yuǎn)高于其他動物模型。
組織工程皮膚研發(fā):利用 SSC-S2 構(gòu)建的組織工程皮膚,與人創(chuàng)面的融合率達(dá) 75%(SSC-S1 為 45%),且術(shù)后 60 天膠原蛋白重塑程度更接近人類正常皮膚(ColⅠ/ColⅢ 比值 1.8 vs 人類 1.7,SSC-S1 為 2.5),已用于重度燒傷患者的臨床前試驗。
外用藥物臨床前評價
化妝品安全性檢測:在 3D 皮膚模型中,某美白成分對 SSC-S2 的刺激性評分(0.8/5 分)與人類皮膚斑貼試驗結(jié)果(0.7 分)高度一致,顯著優(yōu)于 SSC-S1 模型(1.5 分),被多家國際化妝品企業(yè)列為替代動物實驗的shou選模型。
透皮吸收效率研究:某防曬霜的體外透皮速率在 SSC-S2 模型中為 12μg/cm2/h(人類皮膚為 11μg/cm2/h,SSC-S1 模型為 8μg/cm2/h),相關(guān)性達(dá) 91%,為藥物劑型優(yōu)化提供精準(zhǔn)數(shù)據(jù)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:采用 DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、2ng/mL FGF-2,pH 維持在 7.2-7.4;為增強人類同源性特征,可添加 50μM 抗壞血酸,使 ColⅢ 表達(dá)量提升 40%,更接近人類皮膚特性。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 75% 時,按 1:3 比例接種(低于 SSC-S1 的 1:3-1:4),0.25% yi酶 + 0.02% EDTA 聯(lián)合消化 2.5 分鐘(長于 SSC-S1),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 88%,避免過度融合(>85% 會導(dǎo)致 α-Gal 表達(dá)上升)。
凍存保護:采用含 15% DMSO 的無血清凍存液(降低細(xì)胞損傷),細(xì)胞密度 2×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇存活率可達(dá) 85%,需檢測 α-Gal 表達(dá)確認(rèn)表型穩(wěn)定。
異種相關(guān)實驗操作
3D 皮膚模型構(gòu)建:將 5×10?個 SSC-S2 細(xì)胞與膠原支架混合,培養(yǎng) 14 天形成厚度約 500μm 的真皮層,再接種人類角質(zhì)形成細(xì)胞,構(gòu)建的復(fù)合模型與人類皮膚的結(jié)構(gòu)相似度達(dá) 85%(SSC-S1 模型為 65%),適合移植實驗。
病毒交叉感染實驗:接種 HSV-1(MOI=0.1)后,48 小時通過免疫熒光檢測 gD 蛋白,陽性率達(dá) 85%,需設(shè)置 SSC-S1 與人類皮膚細(xì)胞對照,明確種屬差異。
優(yōu)勢:
人類同源性高:皮膚結(jié)構(gòu)、基因表達(dá)及功能特性與人類的一致性顯著高于 SSC-S1,是目前最jie近人類皮膚的豬源細(xì)胞系,臨床前研究結(jié)果的轉(zhuǎn)化價值提升 40%。
異種移植優(yōu)勢:低表達(dá)免疫排斥相關(guān)抗原,免疫相容性優(yōu)于 SSC-S1,為皮膚異種移植研究提供理想材料,移植存活率提升 2-3 倍。
跨物種研究價值:可同時支持豬源與人類皮膚病毒感染,適合人畜共患皮膚病研究,填bu了傳統(tǒng)模型的種屬鴻溝。
局限性:
培養(yǎng)成本高:需添加 FGF-2 等生長因子,培養(yǎng)成本是 SSC-S1 的 2 倍,且對培養(yǎng)基成分更敏感,批間差異稍大。
豬源病毒研究敏感性略低:對豬痘病毒的分離率(85%)低于 SSC-S1(96%),不適合豬源皮膚病毒的高效分離。
倫理爭議:作為實驗動物來源細(xì)胞系,其異種移植研究面臨一定的倫理審查壓力,應(yīng)用范圍受部分法規(guī)限制。
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