目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1378GL-37非洲綠猴腎細胞系
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
來源與克隆背景：該細胞系源自 20 世紀 70 年代分離的非洲綠猴腎原代細胞，通過極限稀釋法篩選獲得單克隆株（“GL" 代表shen源組織特性）。篩選過程以腸道病毒敏感性為核心指標，未引入外源基因，全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 60（近二倍體），與非洲綠猴腎原代細胞遺傳相似度＞97%，核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率＜2%，群體均一性優(yōu)于早期混合株（流式檢測 G1 期細胞比例偏差＜5%）。
形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈短梭形或多邊形，胞質(zhì)透亮，細胞排列較 VERO-76 疏松；懸浮培養(yǎng)易聚集成小團（直徑 30-50μm），以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-32 小時，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，傳代 80 次以上生長速率衰減＜10%，凍存復(fù)蘇后存活率超 87%，無血清馴化后細胞密度可達 3.5×10?個 /cm2。
功能特征：核心優(yōu)勢在于腸道病毒受體高表達與復(fù)制支持能力：脊髓灰質(zhì)炎病毒受體（PVR）表達量較普通猴腎細胞高 3 倍（免疫印跡檢測），柯薩奇病毒 - 腺病毒受體（CAR）陽性率＞90%（流式檢測）。感染脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ 型后 72 小時，病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL，較 VERO-76 細胞高 1-2 個數(shù)量級；感染柯薩奇 B 組病毒后 48 小時，細胞病變（CPE）率達 95%，表現(xiàn)為細胞圓縮、脫落，顯著快于其他猴腎細胞系。
腸道病毒分離與鑒定
腸道病毒疫苗研發(fā)與生產(chǎn)
抗病du藥物篩選與評價
貼壁培養(yǎng)操作：
復(fù)蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（MEM+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24 小時貼壁率超 90%。
換液：接種 48 小時后首ci換液，去除代謝廢物，此后每 2-3 天換液一次，維持細胞密度在 1×10?-6×10?個 /cm2（密度過高會降低腸道病毒敏感性）。
傳代：融合度達 75% 時，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細胞解離液，37℃孵育 2 分鐘，鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止，按 1:5 比例傳代，避免過度融合導(dǎo)致受體表達下調(diào)。
病毒培養(yǎng)流程：
接種準備：將細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板，培養(yǎng) 24 小時至融合度 70%，接種前用無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。
病毒感染：加入 100μL 系列稀釋的腸道病毒液（如脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液），37℃吸附 1 小時，期間每 15 分鐘輕搖一次，吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。
觀察與收獲：脊髓灰質(zhì)炎病毒感染后 48-72 小時觀察 CPE，待 80% 細胞病變時收獲上清，-80℃凍存，通過空斑法或 RT-PCR 測定病毒滴度。
凍存流程：取對數(shù)生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗（確保受體表達穩(wěn)定）。
優(yōu)勢：對腸道病毒（尤其脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒）敏感性ji高（滴度較普通猴腎細胞高 1-2 個數(shù)量級）；遺傳背景穩(wěn)定，實驗重復(fù)性好（CV＜6%）；符合 GMP 標準，無內(nèi)源性病毒污染；可適應(yīng)無血清培養(yǎng)，便于工業(yè)化生產(chǎn)；病毒復(fù)制周期短，病變特征典型，易于觀察。
局限性：對包膜病毒（如狂犬病毒）敏感性較低；貼壁依賴性強，懸浮培養(yǎng)難度高于 CHO 細胞；長期傳代（＞100 次）可能出現(xiàn) PVR 受體表達下調(diào)（約 12%）；缺乏干擾素合成能力，可能高估藥物體內(nèi)抗病毒效果。
以上信息僅供參考，詳細信息請聯(lián)系我們。
13
化工儀器網(wǎng)