目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1386B95-8絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細胞系
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來源與轉(zhuǎn)化機制
形態(tài)與生長特征
遺傳與功能特性
染色體核型：保留絨猴二倍體核型特征（2n=46），長期傳代后異倍體比例＜15%，核型穩(wěn)定性優(yōu)于人類 EBV 轉(zhuǎn)化的 B 細胞系。
EBV 相關(guān)標志物：持續(xù)表達 EBV 潛伏抗原（EBNA1、LMP1）與早期抗原（EA），晚期抗原（VCA）表達率約 30%-40%（免疫熒光檢測），可自發(fā)釋放傳染性 EBV 顆粒（滴度 10?-10? PFU/mL）。
受體表達：高表達 EBV 主要受體 CD21（陽性率＞90%）及 B 細胞表面標志物 CD19、CD20，支持 EBV 再次感染與復制。
EBV 生物學研究
病毒復制周期解析：B95-8 可通過丁酸鈉或巴佛洛霉素 A1 誘導，使 EBV 從潛伏狀態(tài)進入裂解期，實現(xiàn)病毒全生命周期的體外模擬。例如，通過誘導后不同時間點的轉(zhuǎn)錄組分析，已鑒定出 30 余個新的 EBV 裂解期調(diào)控基因，為理解病毒潛伏 - 裂解轉(zhuǎn)換機制提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。
病毒顆粒制備：作為實驗室 EBV 標準來源，其分泌的病毒顆?？捎糜诟腥救?B 淋巴細胞，建立 EBV 轉(zhuǎn)化的永生化細胞模型（轉(zhuǎn)化效率約 10??-10?3），用于研究 EBV 與淋巴瘤、鼻咽癌發(fā)生的關(guān)聯(lián)。
干擾素生產(chǎn)與抗病毒研究
天然干擾素制備：B95-8 在 EBV 刺激下可高表達 Ⅰ 型干擾素（IFN-α/β），經(jīng)誘導后干擾素活性單位可達 10? IU/mL，是早期人用干擾素制劑的重要生產(chǎn)來源。其分泌的干擾素對 EBV、皰疹病毒等具有廣譜抑制作用，為天然抗病du藥物研發(fā)提供參考。
抗病du藥物篩選：基于其 EBV 復制特性，可構(gòu)建藥物篩選模型。例如，通過檢測阿xi洛韋對 EBV DNA 聚合酶的抑制效果，測定藥物 EC??=2.5μM，與臨床療效相關(guān)性達 0.86，為抗 EBV 藥物評估提供可靠平臺。
疫苗研發(fā)與診斷試劑生產(chǎn)
EBV 疫苗候選抗原制備：B95-8 可高效表達 EBV 糖蛋白 gp350（病毒主要包膜蛋白），重組 gp350 純度可達 95% 以上，已用于 EBV 疫苗的臨床前研究，動物實驗顯示其可誘導中和抗體效價達 1:10000 以上。
診斷抗原制備：其表達的 EBV VCA、EA 可作為診斷抗原，用于傳染性單核細胞增多癥及 EBV 相關(guān)腫瘤的血清學檢測（如 ELISA 試劑盒），敏感性達 90%，特異性＞95%。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：RPMI 1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清，pH 維持在 7.2-7.4，可加入 2mM L - 谷an酰胺增強細胞活力。
傳代流程：取對數(shù)生長期細胞懸液，1000rpm 離心 5 分鐘，棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸，按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶，避免細胞密度過高導致凋亡（存活率＜70%）。
凍存保護：取密度 1×10? cells/mL 的細胞懸液，加入等量含 20% DMSO 的wan全培養(yǎng)基（終濃度 10% DMSO），分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
EBV 誘導與收集
裂解期誘導：向?qū)?shù)期細胞中加入 3mM 丁酸鈉，37℃培養(yǎng) 48 小時后更換含 0.1μg/mL 巴佛洛霉素 A1 的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時，EBV 分泌量可提升 5-10 倍。
病毒收集：收集誘導后 72 小時的細胞上清，3000rpm 離心 30 分鐘去除細胞碎片，0.45μm 濾膜過濾后，-80℃分裝保存，使用前需通過噬斑實驗測定滴度。
優(yōu)勢：
EBV 分泌穩(wěn)定：是目前唯yi能持續(xù)釋放高滴度傳染性 EBV 的細胞系，為 EBV 研究提供標準化病毒來源。
功能多樣性：既可用于病毒學基礎(chǔ)研究，又能生產(chǎn)干擾素與診斷抗原，應用場景廣泛。
培養(yǎng)簡便：懸浮生長無需貼壁支持，適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng)，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
局限性：
物種差異：作為絨猴細胞，其 EBV 復制調(diào)控機制與人類細胞存在差異，部分研究結(jié)果需在人源細胞中驗證。
病毒安全性：分泌的 EBV 具有傳染性，操作需在生物安全二級實驗室進行，避免實驗室感染風險。
誘導效率波動：EBV 裂解期誘導效率受細胞代次影響（傳代＞50 次時下降約 40%），需定期篩選高分泌亞克隆。
B95-8 細胞系的建立為 EBV 研究提供了里程碑式工具，其持續(xù)分泌 EBV 的特性推動了 EBV 轉(zhuǎn)化機制、潛伏感染等基礎(chǔ)研究的突破，同時支撐了干擾素藥物與 EBV 診斷試劑的早期開發(fā)。當前，該細胞系仍廣泛應用于 EBV 疫苗研發(fā)、抗病di藥物篩選等領(lǐng)域，并通過基因編輯技術(shù)（如 CRISPR-Cas9 敲除 LMP1）構(gòu)建突變體模型，深入解析 EBV 致癌機制。未來，結(jié)合類器官技術(shù)與 B95-8 來源的 EBV，有望建立更接近體內(nèi)環(huán)境的 EBV 感染模型，為 EBV 相關(guān)疾病的防治提供新的研究思路與技術(shù)支撐。
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