Wrh-f2大鼠肝癌細(xì)胞系
Wrh-f2大鼠肝癌細(xì)胞系作為源自大鼠自發(fā)性肝癌組織的惡性上皮細(xì)胞模型，因具備顯著的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移潛能和藥物抵抗特性，在肝癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制、耐藥性研究及抗腫瘤藥物篩選中具有重要價(jià)值，成為探究肝細(xì)胞癌惡性進(jìn)展的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠自發(fā)性肝癌組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和克隆化篩選建立。細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多為多邊形或短梭形，部分細(xì)胞呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，胞體大小不均（直徑約 20-25μm），胞質(zhì)豐富，可見較多嗜酸性顆粒，約 15% 細(xì)胞呈現(xiàn)多核現(xiàn)象，細(xì)胞核大而畸形，核仁明顯且數(shù)量較多（2-4 個(gè)）。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈雜亂堆疊狀排列，無(wú)接觸抑制，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 94%。核心參數(shù)表現(xiàn)出肝癌細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 38 小時(shí)，連續(xù)傳代 40 次后仍保持穩(wěn)定的增殖能力；染色體核型為亞二倍體（染色體數(shù) 38-40 條），存在多條染色體易位和缺失現(xiàn)象；肝癌特異性標(biāo)志物甲胎蛋白（AFP）陽(yáng)性率達(dá) 90%，白蛋白表達(dá)量為正常肝細(xì)胞的 28%；具有較強(qiáng)的侵襲能力，Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿膜細(xì)胞數(shù)是普通肝癌細(xì)胞系的 2.5 倍；對(duì)常用hua療藥物阿mei素的耐藥指數(shù)為 3.2，表現(xiàn)出明顯的藥物抵抗特性；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在肝癌轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中，Wrh-f2 細(xì)胞經(jīng)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）處理 48 小時(shí)后，基質(zhì)金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）活性增強(qiáng) 4.5 倍，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物 N - 鈣粘蛋白表達(dá)量增加 3.8 倍，遷移能力提升 60%，可模擬肝癌細(xì)胞在肝內(nèi)的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程，為解析肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供理想模型。
藥物耐藥性研究方面，該細(xì)胞在長(zhǎng)期低劑量阿mei素處理后，多藥耐藥基因 1（MDR1）表達(dá)量增加 5.2 倍，細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積量下降 45%，凋亡率降低 60%，可用于探究肝癌細(xì)胞獲得性耐藥的形成機(jī)制，為逆轉(zhuǎn)肝癌耐藥的藥物研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
在抗腫瘤藥物篩選領(lǐng)域，該細(xì)胞對(duì)靶向藥物索拉非尼的敏感性較低，半數(shù)抑制濃度（IC50）為 12μmol/L，是敏感細(xì)胞系的 3 倍，經(jīng)聯(lián)合用藥處理后，凋亡率提升至 58%，適用于評(píng)估聯(lián)合用藥方案的抗肝癌效果。此外，將該細(xì)胞接種于大鼠肝臟，2 周后肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶數(shù)達(dá) 6-8 個(gè)，肺轉(zhuǎn)移率達(dá) 40%，可用于構(gòu)建肝癌多器官轉(zhuǎn)移模型，評(píng)估藥物對(duì)轉(zhuǎn)移灶的抑制作用。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 非必需氨基酸、1mM 丙酮酸鈉及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次，以維持細(xì)胞的高活性。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:3-1:5，每 2-3 天傳代一次，避免細(xì)胞過(guò)度密集影響其侵襲能力。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 6×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 85% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的增殖和侵襲能力。運(yùn)輸采用 T-25 培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作需符合生物安全二級(jí)防護(hù)要求。
Wrh-f2 大鼠肝癌細(xì)胞系以其顯著的轉(zhuǎn)移潛能、藥物抵抗特性及穩(wěn)定的生物學(xué)特征，在肝癌轉(zhuǎn)移與耐藥研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，為揭示肝癌惡性進(jìn)展機(jī)制和開發(fā)新型治療策略提供了可靠的細(xì)胞平臺(tái)。
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