TS-EL-1樹鼩胚胎肺細(xì)胞系
TS-EL-1樹鼩胚胎肺細(xì)胞系在樹鼩胚胎肺臟生物學(xué)研究領(lǐng)域占據(jù)重要地位，為深入探究樹鼩胚胎肺細(xì)胞的特性與功能提供了可靠的體外研究工具，助力科研人員剖析樹鼩胚胎肺的發(fā)育機(jī)制和相關(guān)病理過程。
樹鼩作為進(jìn)化上接近靈長(zhǎng)類的小型哺乳動(dòng)物，其胚胎肺臟的發(fā)育過程，包括支氣管分支、肺泡形成等階段，與高等哺乳動(dòng)物存在諸多相似之處。胚胎肺細(xì)胞作為胚胎肺臟發(fā)育的核心細(xì)胞類型，其增殖、分化和功能成熟的調(diào)控機(jī)制，是理解胚胎肺發(fā)育規(guī)律的關(guān)鍵。以往對(duì)樹鼩胚胎肺發(fā)育的研究多依賴胚胎切片觀察或整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，難以在細(xì)胞層面精準(zhǔn)解析胚胎肺細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化和分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。原代胚胎肺細(xì)胞培養(yǎng)存在分離難度大、存活時(shí)間短、傳代困難等問題，制約了相關(guān)研究的深入開展。因此，TS-EL-1 樹鼩胚胎肺細(xì)胞系的建立，為突破這些研究瓶頸提供了新的解決方案。
TS-EL-1 樹鼩胚胎肺細(xì)胞系來源于樹鼩胚胎的肺組織，通過原代培養(yǎng)結(jié)合純化技術(shù)建立而成。建立過程嚴(yán)格遵循細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)范，在無菌條件下獲取發(fā)育至特定階段的樹鼩胚胎，剝離完整的肺臟組織，去除周圍結(jié)締組織和血管，將肺組zhi剪切成約 1mm3 的小塊。隨后，用含雙抗的磷酸鹽緩沖液多次沖洗，徹di清除血液和雜質(zhì)。接著，加入專用胚胎肺細(xì)胞分散液，在 37℃環(huán)境中處理 25-35 分鐘，期間每隔 8 分鐘輕柔吹打，促使細(xì)胞充分分散。收集細(xì)胞懸液后，經(jīng) 70μm 細(xì)胞濾網(wǎng)過濾，再以 900r/min 的轉(zhuǎn)速離心 6 分鐘，棄去上清液，用含有 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于包被膠原蛋白的培養(yǎng)瓶中，放置在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行原代培養(yǎng)。培養(yǎng)初期，通過差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞等雜細(xì)胞，每 36 小時(shí)更換一次培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 75% 左右時(shí)進(jìn)行傳代操作。目前，該細(xì)胞系已穩(wěn)定傳代至 30 代以上，細(xì)胞活力始終保持在 80% 以上。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的胚胎肺上皮細(xì)胞形態(tài)，多數(shù)細(xì)胞呈多邊形，部分呈短梭形，胞體飽滿，排列呈片狀或團(tuán)狀，胞質(zhì)內(nèi)可見細(xì)小的分泌顆粒，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，具有較強(qiáng)的貼壁生長(zhǎng)特性。在生長(zhǎng)特性方面，研究發(fā)現(xiàn) TS-EL-1 細(xì)胞在含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液中生長(zhǎng)狀態(tài)最佳，相較于其他血清濃度的培養(yǎng)液，細(xì)胞增殖速度提高約 18%。最適宜的培養(yǎng)溫度為 37℃，與哺乳動(dòng)物體溫一致；在此條件下，細(xì)胞群體倍增時(shí)間最短，約為 68 小時(shí)。歷經(jīng) 20 代傳代后，細(xì)胞形態(tài)和增殖速率未出現(xiàn)明顯變化，核型分析顯示其染色體數(shù)目穩(wěn)定，維持樹鼩正常的染色體數(shù)目，遺傳背景可靠，穩(wěn)定保留了胚胎肺細(xì)胞的固有特性。
在功能特性方面，免疫熒光檢測(cè)清晰顯示，TS-EL-1 細(xì)胞高表達(dá)胚胎肺上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物，如表面活性蛋白 A、細(xì)胞角蛋白 18 和 TTF-1，確鑿證實(shí)了其胚胎肺上皮細(xì)胞屬性。該細(xì)胞系具備一定的分泌功能，能合成和分泌表面活性物質(zhì)相關(guān)成分，在模擬胚胎肺臟的功能成熟過程中發(fā)揮著重要作用。當(dāng) TS-EL-1 細(xì)胞受到肺發(fā)育相關(guān)細(xì)胞因子刺激時(shí)，細(xì)胞增殖相關(guān)基因如 PCNA 的表達(dá)量顯著上調(diào)，同時(shí)分化相關(guān)蛋白的合成增加，展現(xiàn)出良好的響應(yīng)能力，為研究胚胎肺細(xì)胞的生長(zhǎng)分化調(diào)控機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。此外，該細(xì)胞系對(duì)缺氧環(huán)境表現(xiàn)出敏感性，在低氧條件下，細(xì)胞增殖速率下降，缺氧誘導(dǎo)因子 HIF-1α 的表達(dá)量升高，為探究胚胎肺臟對(duì)缺氧的適應(yīng)機(jī)制提供了良好的實(shí)驗(yàn)材料。
TS-EL-1 樹鼩胚胎肺細(xì)胞系在多個(gè)研究領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用價(jià)值。在胚胎肺發(fā)育研究中，通過對(duì)該細(xì)胞系進(jìn)行基因編輯實(shí)驗(yàn)，成功揭示了 FOXA2 基因在樹鼩胚胎肺細(xì)胞分化過程中的關(guān)鍵調(diào)控作用。在比較胚胎學(xué)研究方面，借助該細(xì)胞系與其他動(dòng)物胚胎肺細(xì)胞系的對(duì)比分析，清晰闡明了不同物種胚胎肺發(fā)育的差異及其分子機(jī)制。在醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，基于該細(xì)胞系建立的藥物篩選模型，已用于評(píng)估多種影響胚胎肺發(fā)育藥物的安全性和有效性，為先天性肺部疾病的病因研究和藥物研發(fā)提供了有力支持。
作為穩(wěn)定可靠的樹鼩胚胎肺細(xì)胞模型，TS-EL-1 不僅為樹鼩胚胎肺發(fā)育研究提供了重要的技術(shù)支撐，推動(dòng)了相關(guān)學(xué)術(shù)研究的深入發(fā)展，還有助于提升對(duì)樹鼩這種模式生物的研究水平，為人類胚胎肺發(fā)育異常及相關(guān)疾病的研究和治療提供了有價(jià)值的參考，在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用領(lǐng)域均具有重要意義。
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