SK-HEP-1人肝腹水腺癌細(xì)胞系
SK-HEP-1人肝腹水腺癌細(xì)胞系是研究肝癌轉(zhuǎn)移及晚期進(jìn)展的重要模型，以高侵襲轉(zhuǎn)移潛能、上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化特征及肝腹水來(lái)源的惡性表型為核心，在肝癌腹腔轉(zhuǎn)移機(jī)制、血管生成及藥物敏感性研究中應(yīng)用廣泛，為解析肝癌晚期進(jìn)展及腹水形成機(jī)制提供了可靠實(shí)驗(yàn)載體。
來(lái)源與背景：該細(xì)胞系于 1973 年從 57 歲男性肝癌患者的肝腹水樣本中分離建立，屬于晚期肝癌轉(zhuǎn)移灶來(lái)源的細(xì)胞系。與原發(fā)灶來(lái)源的肝癌細(xì)胞系（如 HepG2）相比，其更能反映肝癌晚期腹腔轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，尤其適合研究肝癌從原發(fā)灶向腹腔擴(kuò)散的分子事件。作為首ge穩(wěn)定傳代的肝腹水腺癌細(xì)胞系，SK-HEP-1 的建立填bu了肝癌腹腔轉(zhuǎn)移研究模型的空白，其與 HepG2 等原發(fā)灶細(xì)胞系的對(duì)比研究，為解析肝癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供了du特視角，至今仍是肝癌轉(zhuǎn)移研究的經(jīng)典參照。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)上皮樣與間質(zhì)樣混合特征，貼壁生長(zhǎng)且排列松散，部分細(xì)胞呈梭形，邊界不清，細(xì)胞質(zhì)較少，細(xì)胞核大而畸形，核仁明顯，核質(zhì)比約 1:1.1，具有晚期肝癌細(xì)胞的典型惡性形態(tài)。核心特性體現(xiàn)為上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）特征，低表達(dá)上皮標(biāo)志物 E - 鈣粘蛋白，高表達(dá)間質(zhì)標(biāo)志物 N - 鈣粘蛋白和波形蛋白，N - 鈣粘蛋白陽(yáng)性率達(dá) 80%，與約 60% 的轉(zhuǎn)移性肝癌患者一致；高侵襲轉(zhuǎn)移能力，Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿膜細(xì)胞數(shù)是 HepG2 的 2.5 倍，裸鼠腹腔接種后腹水形成率 100%，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移率達(dá) 75%，顯著高于原發(fā)灶來(lái)源細(xì)胞系；增殖與血管生成，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 36-48 小時(shí)，克隆形成率約 55%，分泌的 VEGF 水平是正常肝細(xì)胞的 12 倍，裸鼠皮下接種成瘤率 100%，腫瘤組織內(nèi)血管密度是 HepG2 的 1.8 倍。傳代時(shí)采用常規(guī)消化液處理，因貼壁中等，需消化 3-4 分鐘，傳代比例 1:3-1:5，連續(xù)傳代 50 次后仍保持高侵襲特性及 EMT 表型。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，添加 1% 抗菌劑，培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。細(xì)胞密度維持在 20%-60%，過(guò)度匯合會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞間質(zhì)樣特征增強(qiáng)，E - 鈣粘蛋白表達(dá)進(jìn)一步下降 15%。對(duì)血清中生長(zhǎng)因子敏感，去除血清后細(xì)胞凋亡率從 8% 升至 30%，傳代時(shí)用含血清培養(yǎng)基終止消化，凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清，復(fù)蘇后存活率可達(dá) 80% 以上，24 小時(shí)貼壁率超過(guò) 85%，細(xì)胞功能恢復(fù)正常。
檢測(cè)鑒定：經(jīng)微生物篩查，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及常見(jiàn)病毒污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示甲胎蛋白（AFP）陽(yáng)性率約 60%，癌胚抗原（CEA）弱陽(yáng)性，證實(shí)其肝癌細(xì)胞特性。基因測(cè)序證實(shí)存在 KRAS 野生型、TP53 突變（R273C），該突變與約 30% 的轉(zhuǎn)移性肝癌患者一致。染色體核型分析呈現(xiàn)亞四倍體核型，存在 11 號(hào)染色體長(zhǎng)臂擴(kuò)增、17 號(hào)染色體短臂缺失等異常，與 50% 的晚期肝癌患者遺傳學(xué)改變吻合。功能驗(yàn)證中，VEGF 刺激后細(xì)胞遷移能力提升 40%，證實(shí)其血管生成依賴性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中，該細(xì)胞系被廣泛用于揭示肝癌腹腔轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn) Snail 蛋白過(guò)表達(dá)可使 E - 鈣粘蛋白下降 40%，侵襲能力提升 50%，為 “EMT - 轉(zhuǎn)移" 調(diào)控軸提供了直接證據(jù)。在血管生成研究中，通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）可上調(diào) VEGF 表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為抗血管生成藥物研發(fā)提供靶點(diǎn)。在藥物敏感性研究中，其對(duì)索拉非尼的 IC50 值約為 8μM，高于 HepG2，提示晚期肝癌的耐藥性，聯(lián)合 MEK 抑制劑后抑制率從 35% 提升至 65%，推動(dòng)了聯(lián)合用藥方案的探索。此外，該細(xì)胞系可用于研究腹水形成機(jī)制，發(fā)現(xiàn)其分泌的透明質(zhì)酸酶水平是 HepG2 的 3 倍，為腹水形成的分子基礎(chǔ)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
與其他肝癌細(xì)胞系相比，SK-HEP-1 的優(yōu)勢(shì)在于其肝腹水來(lái)源的晚期轉(zhuǎn)移特性、高侵襲能力及 EMT 表型，能更真實(shí)模擬肝癌晚期腹腔轉(zhuǎn)移的病理過(guò)程。通過(guò)對(duì)該細(xì)胞系的研究，為肝癌轉(zhuǎn)移標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)及晚期治療策略開(kāi)發(fā)提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)，持續(xù)推動(dòng)肝癌轉(zhuǎn)移研究與臨床轉(zhuǎn)化的結(jié)合。
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