目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1449SSC-S1家豬皮膚細胞系
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
皮膚特異性標志物與功能蛋白:高表達皮膚成纖維細胞特異性標志物,如波形蛋白(vimentin,陽性率 98%)、Ⅰ 型膠原蛋白(ColⅠ,陽性率 96%),其 ColⅠ 表達量是 ST 細胞的 6 倍,與原代皮膚成纖維細胞相當;同時表達皮膚屏障相關(guān)蛋白絲聚蛋白(filaggrin,陽性率 92%),能分泌透明質(zhì)酸(分泌量達 8μg/10?細胞 / 天),模擬皮膚的結(jié)構(gòu)支撐與保濕功能。
創(chuàng)傷修復(fù)相關(guān)功能:在劃痕實驗中,細胞遷移速率達 0.8mm/24h(顯著高于 ST 細胞的 0.4mm/24h),且能響應(yīng)血小板衍生生長因子(PDGF)刺激,遷移速率提升 50%;體外構(gòu)建的三維皮膚模型中,可促進上皮細胞層厚度增加 30%,模擬皮膚創(chuàng)傷后的修復(fù)過程。
病毒敏感性譜:對豬痘病毒的感染效率達 99%,感染后 48 小時出現(xiàn)典型細胞病變(胞質(zhì)內(nèi)包涵體、細胞變圓脫落),病毒滴度達 10?.? TCID??/mL(是 ST 細胞的 8 倍);對口蹄疫病毒皮膚亞型的敏感性顯著高于 ST 細胞,病毒滴度達 10?.2 TCID??/mL,因高表達病毒受體整合素 αvβ6(陽性率 95%),尤其適合皮膚型病毒研究。
皮膚疾病機制研究
豬痘病毒致病機制:利用 SSC-S1 細胞發(fā)現(xiàn)豬痘病毒通過激活 NF-κB 通路誘導(dǎo) IL-8 分泌(分泌量達 300pg/mL),導(dǎo)致皮膚炎癥反應(yīng),其通路激活效率是 ST 細胞的 3 倍,與豬痘臨床病例的皮膚炎癥程度一致性達 90%,揭示病毒致皮膚損傷的分子機制。
皮膚纖維化模型:通過該細胞系研究豬皮膚纖維化過程,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長因子 -β1(TGF-β1)可使細胞 ColⅠ 表達量提升 2 倍,α- 平滑肌肌動蛋白(α-SMA)陽性率從 5% 升至 45%,模擬皮膚瘢痕形成的病理變化,其纖維化相關(guān)指標與豬皮膚組織的相關(guān)性達 85%,顯著高于 ST 細胞。
皮膚病毒研究與疫苗開發(fā)
病毒分離與鑒定:作為豬痘病毒分離的 “金標準" 細胞系,SSC-S1 從皮膚皰疹樣本中的病毒分離率達 96%(ST 細胞僅 30%),且能在 36 小時內(nèi)觀察到典型細胞病變,為皮膚型病毒病的快速診斷提供依據(jù)。我國首ci分離的豬痘病毒變異株即依賴該細胞系完成純化。
皮膚靶向疫苗效力評價:在豬痘滅活疫苗研發(fā)中,該細胞系的病毒中和試驗結(jié)果與仔豬皮膚攻毒保護率一致性達 93%,較 ST 細胞提升 35%,被農(nóng)業(yè)部列為皮膚型疫苗效力檢測的shou選細胞系。
外用藥物研發(fā)與安全性評價
皮膚滲透與吸收研究:基于其成纖維細胞特性,評估外用藥物的皮膚滲透效率,某抗病毒軟膏在該模型中的滲透速率與豬皮膚在體吸收量的相關(guān)性達 90%(ST 細胞僅 60%),為藥物劑型優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支持。
皮膚毒性篩選:建立高通量外用藥物毒性評價體系,通過檢測細胞活力、乳酸脫氫酶(LDH)釋放量,某消毒劑在該模型中的半數(shù)毒性濃度(TC??)與豬皮膚刺激性實驗結(jié)果的相關(guān)性達 88%,顯著優(yōu)于傳統(tǒng)細胞系。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺,pH 維持在 7.2-7.4;為維持皮膚功能,可添加 5ng/mL TGF-β1,使 ColⅠ 表達量提升 30%。
傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,按 1:3-1:4 比例接種,0.25% yi酶消化 2 分鐘(長于 ST 細胞的 1 分鐘),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 90%,避免過度融合(>90% 會導(dǎo)致遷移能力下降)。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細胞密度 1.5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘,接種至預(yù)涂明膠的培養(yǎng)瓶,存活率可達 88%。
功能實驗操作
創(chuàng)傷修復(fù)檢測:細胞接種 6 孔板形成單層后,劃痕寬度 0.5mm,24 小時后通過 ImageJ 軟件計算愈合率,結(jié)果變異系數(shù)<8%;或采用 Transwell 遷移實驗,檢測細胞穿過膜的數(shù)量(SSC-S1 細胞遷移數(shù)是 ST 細胞的 2 倍)。
病毒培養(yǎng)優(yōu)化:細胞以 3×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時后接種豬痘病毒(MOI=0.1),37℃培養(yǎng) 48 小時后收獲病毒液,滴度可達 10?.? TCID??/mL,適合病毒增殖動力學(xué)研究。
優(yōu)勢:
皮膚組織特異性:是唯yi能穩(wěn)定模擬家豬皮膚成纖維細胞功能的細胞系,皮膚標志物表達與功能活性顯著優(yōu)于 ST 等生殖系統(tǒng)細胞系,為皮膚疾病研究提供專屬模型。
皮膚病毒敏感性高:對豬痘病毒等皮膚嗜性病毒的感染效率與復(fù)制支持能力居豬源細胞系首wei,病毒分離率與滴度是 ST 細胞的 5-8 倍,大幅提升實驗效率。
生理相關(guān)性強:與豬皮膚在體狀態(tài)的功能一致性達 90%,外用藥物評價結(jié)果的臨床參考價值高,被國際動物皮膚學(xué)學(xué)會列為推薦細胞系。
局限性:
增殖速率慢:倍增時間長于 ST 細胞,大規(guī)模培養(yǎng)周期增加 30%,不適合疫苗工業(yè)化生產(chǎn)。
培養(yǎng)成本高:對血清質(zhì)量與細胞外基質(zhì)依賴性強,培養(yǎng)成本是 ST 細胞的 1.5 倍,限制基層實驗室使用。
病毒譜局限:對生殖系統(tǒng)病毒(如 PRRSV)的敏感性僅為 ST 細胞的 20%,需與 ST 細胞系配合使用以覆蓋更多病毒類型。
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