來源與形態(tài)：CHO-K1 源自中國倉鼠卵巢細胞（CHO），通過單細胞克隆技術(shù)篩選獲得純度更高的亞系。體外培養(yǎng)時呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細胞呈多邊形，排列緊密且邊界清晰，較野生型 CHO 細胞形態(tài)更均一。在 37℃、5% CO?的培養(yǎng)條件下，增殖速度穩(wěn)定，傳代周期約 2-3 天，可適應(yīng)貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)基體系，尤其適合高密度培養(yǎng)。

遺傳特征：保留 CHO 細胞的非整倍體核型（染色體數(shù)目約 20-22 條），但核型更穩(wěn)定，基因組背景清晰，無內(nèi)源性病毒序列。與 dhFr 缺陷型 CHO 細胞不同，CHO-K1 為原型細胞系，不攜帶營養(yǎng)缺陷標(biāo)記，可自主合成核酸前體物質(zhì)，無需依賴外源性營養(yǎng)補充。其基因組對外源基因的容納能力強，轉(zhuǎn)染后可通過抗性篩選快速獲得穩(wěn)定表達株，且長期傳代后仍能維持目標(biāo)蛋白的表達穩(wěn)定性。

優(yōu)勢：培養(yǎng)條件簡單，無需特殊營養(yǎng)補充，適合實驗室小規(guī)模研究與工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)；遺傳穩(wěn)定性高，實驗重復(fù)性好，被國際監(jiān)管機構(gòu)（如 FDA、EMA）認可為生物藥生產(chǎn)的合規(guī)細胞系；對外源基因的兼容性強，可表達多種類型的重組蛋白，且表達量穩(wěn)定。

局限性：重組蛋白表達量通常低于 dhFr 缺陷型 CHO 細胞（需通過基因編輯或培養(yǎng)優(yōu)化提升產(chǎn)量）；部分復(fù)雜蛋白（如多亞基蛋白）的表達效率較低，可能受限于細胞自身的折疊與組裝能力；長期懸浮培養(yǎng)可能出現(xiàn)細胞聚集體，影響蛋白純化效率。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 或 MEM 培養(yǎng)基，添加青mei素 - 鏈mei素預(yù)防污染。若用于蛋白生產(chǎn)，可改用化學(xué)成分明確的無血清培養(yǎng)基，減少外源蛋白干擾。培養(yǎng)過程中需控制細胞密度（貼壁培養(yǎng)融合度不超過 85%），避免過度密集導(dǎo)致細胞形態(tài)改變或增殖停滯。

污染防控：貼壁細胞易受支原體、真菌污染，需定期通過 PCR 或熒光染色檢測；凍存時使用含 10% DMSO 的凍存液，液氮保存可長期維持活性，復(fù)蘇時 37℃快速解凍并離心去除 DMSO，降低細胞損傷風(fēng)險。