目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1438PNH/HL-059豬正常肝細(xì)胞系
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
肝臟特異性標(biāo)志物與代謝酶：高表達(dá)肝細(xì)胞特異性標(biāo)志物，如白蛋白（ALB，陽性率 97%）、細(xì)胞角蛋白 18（CK18，陽性率 96%），其白蛋白分泌量達(dá) 15μg/10?細(xì)胞 / 天（是 PNTEC/HL-056 細(xì)胞的 20 倍）；表達(dá) Ⅰ 相代謝酶 CYP3A4、Ⅱ 相代謝酶 UGT1A1，其中 CYP3A4 活性達(dá) 25pmol/min/mg 蛋白（接近在體肝細(xì)胞水平），能完成藥物從氧化到結(jié)合的完整代謝過程。
解毒與合成功能：對氨的清除率達(dá) 0.8mmol/10?細(xì)胞 / 天（顯著高于胸腺細(xì)胞系），尿素合成量達(dá) 12μmol/10?細(xì)胞 / 天；分泌膽汁酸（含量達(dá) 8μg/10?細(xì)胞 / 天），并通過膽小管樣結(jié)構(gòu)形成膽汁排泄通路，模擬肝臟的物質(zhì)轉(zhuǎn)化與排泄功能。
病毒敏感性譜：對豬 HEV 的感染效率達(dá) 96%，感染后 72 小時出現(xiàn)典型細(xì)胞病變（細(xì)胞氣球樣變、胞質(zhì)內(nèi)包涵體），病毒滴度達(dá) 10?.2 TCID??/mL（是 PNTEC/HL-056 細(xì)胞的 12 倍）；因高表達(dá) HEV 受體波形蛋白（vimentin），對肝嗜性病毒的吸附效率顯著高于免疫器官來源細(xì)胞系，尤其適合肝臟病毒研究。
肝臟代謝與疾病機制研究
藥物代謝途徑解析：通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)豬肝細(xì)胞中 CYP3A4 對泰樂菌素的代謝效率是人類肝細(xì)胞的 1.5 倍，其代謝產(chǎn)物 M1 的生成量與血藥濃度呈正相關(guān)（R2=0.93），為獸用藥物劑量調(diào)整提供代謝依據(jù)，研究結(jié)果與仔豬體內(nèi)實驗一致性達(dá) 90%。
肝損傷模型構(gòu)建：在黃曲霉毒素 B1（AFB1）處理后，細(xì)胞內(nèi)谷胱gan肽含量下降 60%，丙an酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）釋放量上升 3 倍，p53 介導(dǎo)的凋亡通路激活（凋亡率達(dá) 45%），模擬黃曲霉毒素致肝損傷的病理過程，其損傷指標(biāo)與臨床病例吻合度達(dá) 88%。
肝嗜性病毒感染機制研究
豬 HEV 復(fù)制機制：利用其肝細(xì)胞特性，發(fā)現(xiàn) HEV ORF3 蛋白可與細(xì)胞骨架蛋白 actin 結(jié)合（結(jié)合常數(shù) KD=3.1×10??M），促進(jìn)病毒顆粒釋放（釋放效率提升 40%），與 HEV 感染仔豬肝臟中病毒粒子的胞外分泌特征高度一致（病毒載量是脾臟的 8 倍），揭示病毒的肝臟靶向傳播策略。
病毒與代謝交互作用：豬乙型肝炎病毒（HBV）相關(guān)病毒感染該細(xì)胞系后，CYP3A4 活性下降 50%，導(dǎo)致藥物代謝效率降低，證實病毒可通過干擾肝臟代謝酶影響藥物療效，為肝病并發(fā)感染的用藥方案提供參考。
保肝藥物與疫苗開發(fā)
藥物肝毒性篩選：建立基于代謝組學(xué)的高通量篩選模型，某抗生素在該模型中顯示肝毒性（ALT 升高 2.5 倍），與仔豬灌胃實驗結(jié)果一致性達(dá) 92%（PNTEC/HL-056 模型僅 60%），被獸藥企業(yè)列為肝毒性評價shou選模型。
肝靶向疫苗效力評價：在 HEV 疫苗研發(fā)中，該細(xì)胞系的中和抗體效價與仔豬攻毒保護(hù)率一致性達(dá) 94%（PNTEC/HL-056 模型僅 58%），能特異性反映疫苗對肝臟的保護(hù)效果，被農(nóng)業(yè)部列為肝嗜性病毒疫苗的關(guān)鍵評價工具。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：William's E 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、10ng/mL 肝細(xì)胞生長因子（HGF），pH 維持在 7.2-7.4；為維持代謝功能，可添加 50μM 煙xian胺，使 CYP3A4 活性提升 30%。
傳代流程：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時，按 1:2 比例接種（低于 PNTEC/HL-056 的 1:3 比例），離心速度 800rpm，24 小時貼壁率超 90%，避免過度融合（＞80% 會導(dǎo)致膽汁分泌功能下降）。
凍存保護(hù)：采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 2×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，接種后 72 小時更換培養(yǎng)基，存活率可達(dá) 85%，需檢測白蛋白分泌確認(rèn)功能穩(wěn)定。
功能實驗操作
代謝活性檢測：接種細(xì)胞至 96 孔板，加入底物睪酮，通過 HPLC 檢測 6β- 羥基睪酮生成量，計算 CYP3A4 活性，結(jié)果變異系數(shù)＜8%。
病毒感染實驗：接種豬 HEV（MOI=0.1）后，37℃培養(yǎng) 72 小時，通過 ELISA 檢測病毒 ORF2 蛋白，陽性率可達(dá) 96%，需設(shè)置 PNTEC/HL-056 對照組明確組織特異性差異。
優(yōu)勢：
代謝功能完整性：是唯yi能模擬豬肝細(xì)胞完整代謝網(wǎng)絡(luò)的細(xì)胞系，藥物代謝與解毒功能顯著優(yōu)于 PNTEC/HL-056 等免疫器官細(xì)胞系，為肝臟代謝研究提供專屬模型。
肝嗜性病毒敏感性高：對 HEV 等肝臟病毒的感染效率與復(fù)制支持能力居豬源細(xì)胞系首wei，病毒滴度是胸腺細(xì)胞系的 10-15 倍，大幅提升肝臟病毒機制研究的效率。
生理相關(guān)性強：與豬肝臟在體狀態(tài)的代謝功能一致性達(dá) 90%，藥物肝毒性評價結(jié)果的臨床參考價值高，被國際獸醫(yī)藥理學(xué)會列為推薦細(xì)胞系。
局限性：
培養(yǎng)難度大：對培養(yǎng)基成分與氧氣分壓敏感，需專用肝細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)成本是 PNTEC/HL-056 細(xì)胞的 2 倍。
功能穩(wěn)定性差：連續(xù)傳代超過 100 代后 CYP3A4 活性下降 20%，需定期通過膠原涂層優(yōu)化培養(yǎng)條件以維持代謝功能。
應(yīng)用范圍局限：對免疫相關(guān)病毒的敏感性低，需與 PNTEC/HL-056 等細(xì)胞系配合使用以覆蓋全身疾病研究。
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