構(gòu)建背景：mpl 是血小板生成素（TPO）的特異性受體，在巨核細(xì)胞增殖分化與血小板生成中起關(guān)鍵作用。該細(xì)胞系通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將含 mpl 基因的 pDSr a2 載體（含 SV40 啟動(dòng)子與新mei素抗性基因）導(dǎo)入 CHO 細(xì)胞，經(jīng) G418 篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)株，“X" 代表克隆編號，確保細(xì)胞群的均一性。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)時(shí)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細(xì)胞呈多邊形，排列緊密，形態(tài)與親本 CHO 細(xì)胞一致。在 37℃、5% CO?條件下，傳代周期約 2-3 天，可適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，同時(shí)兼容無血清培養(yǎng)體系，懸浮培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞存活率可達(dá) 85% 以上，增殖穩(wěn)定性優(yōu)于普通轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

表達(dá)特征：mpl 蛋白定位于細(xì)胞膜，表達(dá)量可通過 Western blot 或流式細(xì)胞術(shù)定量（平均每細(xì)胞約 1×10?-5×10?個(gè)受體），且長期傳代（＞30 代）后表達(dá)量波動(dòng)＜10%。載體中的 SV40 啟動(dòng)子確保基因持續(xù)表達(dá)，新mei素抗性基因便于維持細(xì)胞株純度，避免非表達(dá)細(xì)胞污染。

優(yōu)勢：mpl 表達(dá)穩(wěn)定且可控，避免原代細(xì)胞的異質(zhì)性問題；保留 CHO 細(xì)胞的易培養(yǎng)特性，適合大規(guī)模實(shí)驗(yàn)；功能特異性高，僅響應(yīng) mpl 通路相關(guān)刺激，減少背景干擾；可通過基因編輯進(jìn)一步改造（如敲除內(nèi)源性信號分子），提升研究精準(zhǔn)度，被多家實(shí)驗(yàn)室列為 mpl 相關(guān)研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系。

局限性：作為異源表達(dá)系統(tǒng)，mpl 的糖基化模式與人類細(xì)胞存在細(xì)微差異，可能影響配體結(jié)合效率；長期培養(yǎng)需維持 G418 篩選壓力（通常 400μg/mL），否則易丟失表達(dá)質(zhì)粒；無法wan全模擬體內(nèi)巨核細(xì)胞的分化環(huán)境，研究生理功能時(shí)需結(jié)合動(dòng)物模型驗(yàn)證。

培養(yǎng)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基為含 10% 胎牛血清、400μg/mL G418 的 DMEM/F12，添加青mei素 - 鏈mei素防污染。傳代時(shí)用 0.25% yi酶消化，貼壁培養(yǎng)融合度控制在 70%-80%，避免過度密集導(dǎo)致表達(dá)量下降。進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)前，需用無 G418 培養(yǎng)基培養(yǎng) 1-2 代，排除藥物對細(xì)胞活性的影響。

功能檢測優(yōu)化：檢測通路激活時(shí)，推薦使用無血清培養(yǎng)基饑餓處理 12 小時(shí)，減少血清因子干擾；TPO 刺激濃度通常為 10-100ng/mL，作用時(shí)間根據(jù)檢測指標(biāo)調(diào)整（如磷酸化蛋白檢測取 15-60 分鐘，增殖實(shí)驗(yàn)取 48-72 小時(shí)）。

凍存與復(fù)蘇：凍存液含 10% DMSO 與 400μg/mL G418，液氮保存可維持活性 3 年以上；復(fù)蘇時(shí) 37℃快速解凍，離心后用含 G418 的培養(yǎng)基重懸，傳代 2 次后再用于實(shí)驗(yàn)，確保細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定。