目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1385COS-1非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞系
供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
---|
來源與轉(zhuǎn)化機制
形態(tài)與生長特征
遺傳與功能特性
染色體核型:保留非洲綠猴核型特征(2n=60),長期傳代后異倍體比例<10%,遺傳穩(wěn)定性優(yōu)于部分轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。
轉(zhuǎn)染效率:對脂質(zhì)體、磷酸鈣等轉(zhuǎn)染方法敏感性高,瞬時轉(zhuǎn)染效率可達 70%-80%(如使用 Lipofectamine 3000 試劑),適用于高通量基因功能篩選。
病毒兼容性:除支持 SV40 病毒復(fù)制外,對腺病毒、皰疹病毒等 DNA 病毒也具有感染敏感性,可用于病毒包裝與復(fù)制機制研究。
基因瞬時表達與功能分析
外源基因超表達:利用含 SV40 ori 的表達載體(如 pSV-SPORT1),可在 COS-1 中實現(xiàn)目的蛋白的高效瞬時表達,48-72 小時表達量可達細(xì)胞總蛋白的 10%-20%。例如,通過表達熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜受體,可直接觀察其在活細(xì)胞中的定位與動態(tài)變化,為受體轉(zhuǎn)運機制研究提供可視化證據(jù)。
蛋白質(zhì)相互作用研究:基于其高表達特性,可通過免疫共沉淀(Co-IP)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)等技術(shù)解析蛋白 - 蛋白相互作用。例如,在 COS-1 中共表達病毒蛋白與宿主細(xì)胞因子,可精準(zhǔn)捕獲二者結(jié)合的復(fù)合體,揭示病毒致病的分子機制。
病毒學(xué)研究與載體開發(fā)
病毒復(fù)制機制解析:COS-1 可支持 SV40 病毒的完整復(fù)制周期,包括早期基因轉(zhuǎn)錄、DNA 復(fù)制及晚期蛋白表達,是研究 SV40 與宿主細(xì)胞相互作用的經(jīng)典模型。通過構(gòu)建 T 抗原突變體,已明確其在病毒 DNA 復(fù)制起始中的關(guān)鍵作用。
病毒載體包裝:可作為包裝細(xì)胞生產(chǎn)含 SV40 元件的重組病毒載體(如腺相關(guān)病毒 AAV),其高轉(zhuǎn)染效率與復(fù)制支持能力可提升重組病毒滴度(較 HEK293 細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級),為基因治療載體研發(fā)提供優(yōu)質(zhì)工具。
重組蛋白生產(chǎn)與藥物篩選
功能性蛋白制備:COS-1 可正確折疊復(fù)雜結(jié)構(gòu)蛋白(如膜蛋白、糖蛋白),其表達的重組蛋白保留天然生物學(xué)活性。例如,在該細(xì)胞系中表達的人胰島素受體,可用于胰島素類似物的結(jié)合活性檢測,為糖尿病藥物研發(fā)提供關(guān)鍵試劑。
藥物靶點驗證:通過穩(wěn)定表達疾病相關(guān)基因(如癌基因、受體基因),可構(gòu)建藥物篩選模型。例如,在 COS-1 中表達 EGFR 突變體,可用于肺癌靶向藥物的敏感性測試,篩選特異性抑制劑。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 高糖培養(yǎng)基(含 4.5g/L 葡萄糖)添加 10% 胎牛血清、100U/mL 青mei素及 100μg/mL 鏈mei素,pH 維持在 7.2-7.4。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達 70%-80% 時,棄去舊培養(yǎng)基,用 PBS 洗滌 2 次,加入 0.25% yi酶 - EDTA 消化液,37℃孵育 3-5 分鐘至細(xì)胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)皿。
凍存保護:取對數(shù)生長期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 5×10? cells/mL,分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜,轉(zhuǎn)移至液氮長期保存。
轉(zhuǎn)染與病毒感染操作
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染:采用脂質(zhì)體法時,DNA 與轉(zhuǎn)染試劑比例為 1:2.5,在無血清培養(yǎng)基中孵育 6 小時后更換為wan全培養(yǎng)基,48 小時后檢測蛋白表達。
病毒感染:接種 SV40 病毒時,按 MOI=5-10 加入病毒液,37℃吸附 2 小時后更換維持培養(yǎng)基(含 2% 血清),72 小時后收集細(xì)胞裂解液提取病毒顆粒。
優(yōu)勢:
基因表達效率高:含 SV40 ori 的質(zhì)粒在其體內(nèi)可高效復(fù)制,外源蛋白表達量顯著高于普通細(xì)胞系,適合低豐度蛋白研究。
遺傳穩(wěn)定性好:長期傳代后仍保持 SV40 大 T 抗原表達與質(zhì)粒復(fù)制能力,實驗重復(fù)性佳(CV<10%)。
適用范圍廣:可用于多種病毒研究、蛋白功能分析及藥物篩選,是通用性強的實驗?zāi)P汀?/span>
局限性:
翻譯后修飾差異:作為猴源細(xì)胞,其蛋白質(zhì)糖基化模式與人類細(xì)胞存在差異,可能影響重組蛋白的臨床應(yīng)用評估。
復(fù)制依賴限制:僅能高效表達含 SV40 ori 的載體,對無該元件的質(zhì)粒支持能力較弱。
潛在安全風(fēng)險:SV40 大 T 抗原可能激活原癌基因,實驗操作需遵循生物安全規(guī)范。
COS-1 細(xì)胞系的建立為基因表達技術(shù)提供了里程碑式工具,其介導(dǎo)的高效瞬時表達系統(tǒng)推動了早期基因克隆與蛋白功能研究的突破。在當(dāng)代生物技術(shù)領(lǐng)域,其仍廣泛應(yīng)用于病毒載體開發(fā)、藥物靶點驗證等前沿方向,并通過無血清培養(yǎng)、懸浮馴化等技術(shù)優(yōu)化,逐步適應(yīng)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)需求。未來,結(jié)合基因編輯技術(shù)(如 CRISPR-Cas9)對其進行改造,有望進一步提升外源基因表達效率與蛋白修飾的人源化程度,為基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化提供更優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞模型。
以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請聯(lián)系我們。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)