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目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1395猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系

猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系

  • 猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
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  • 品牌 其他品牌
  • 型號 BY-1395
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

供貨周期:現(xiàn)貨

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更新時間:2025-07-31 16:14:30瀏覽次數(shù):133評價

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猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系,上皮樣,懸浮生長,保留對 PRRSV 敏感性,支持高效復制,適用于病毒大規(guī)模培養(yǎng)及疫苗工業(yè)化生產(chǎn)。
猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系
猴胚胎腎上皮細胞Marc-145懸浮適應株細胞系,猴胚胎腎上皮細胞 Marc-145 懸浮適應株是在貼壁生長的 Marc-145 細胞基礎上,通過逐步適應懸浮培養(yǎng)環(huán)境篩選獲得的細胞模型。其保留對豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的高敏感性,同時具備懸浮生長特性,成為病毒大規(guī)模培養(yǎng)及疫苗工業(yè)化生產(chǎn)的核心工具。該細胞系突破了傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)的空間限制,為 PRRSV 相關(guān)生物制品的高效生產(chǎn)提供了革新性平臺。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與適應機制

Marc-145 細胞源自 MA104 細胞的克隆株,而懸浮適應株通過連續(xù)傳代馴化獲得:將貼壁 Marc-145 細胞接種于無血清懸浮培養(yǎng)基,初始以 1×10? cells/mL 密度培養(yǎng),每 3-4 天傳代一次,逐步降低血清濃度(從 10% 降至 0.5%),經(jīng) 30-40 代篩選后獲得穩(wěn)定懸浮生長的細胞群體。其適應機制與細胞骨架重塑(如 β- 肌動蛋白重排)、黏附分子(如 E - 鈣粘蛋白)表達下調(diào)相關(guān),使細胞擺脫對貼壁基質(zhì)的依賴,形成直徑 50-100μm 的細胞團。
  1. 形態(tài)與生長特征

細胞呈上皮樣與圓形混合形態(tài),懸浮生長時以松散細胞團為主,部分單個細胞游離,胞質(zhì)均勻,核質(zhì)比高。在 37℃、5% CO?的懸浮培養(yǎng)體系中,使用含 0.5% 血清的 SFM II 培養(yǎng)基(添加重組胰島素與轉(zhuǎn)鐵蛋白),倍增時間約 28-36 小時,比生長速率(μ)達 0.025/h,顯著高于貼壁細胞(0.018/h)。細胞密度可穩(wěn)定維持在 1×10?-3×10? cells/mL,最高密度達 5×10? cells/mL(無血清條件),凍存復蘇存活率超 90%,連續(xù)傳代 60 次后生長特性無顯著變化。
  1. 功能特性

  • 病毒敏感性:保留對 PRRSV 的高易感性,感染效率達 90% 以上(流式細胞術(shù)檢測),48 小時病毒滴度達 10?-10? TCID??/mL,與貼壁細胞相當;對 PRRSV 的歐洲型、美洲型及高致病性毒株均具有廣譜適應性,滴度差異<0.5 個數(shù)量級。

  • 代謝特性:葡萄糖消耗速率為 20-30 mg/10? cells / 天,乳酸積累速率低于貼壁細胞(降低約 30%),更適合高密度培養(yǎng);谷an酰胺利用率提升 25%,可通過補料策略延長對數(shù)生長期至 72 小時。

  • 遺傳穩(wěn)定性:核型分析顯示仍保留猴源細胞二倍體特征(2n=42),染色體畸變率<8%,PRRSV 受體 CD163 表達量與貼壁細胞無顯著差異(qPCR 檢測)。

二、核心應用領(lǐng)域
  1. PRRSV 大規(guī)模培養(yǎng)與疫苗生產(chǎn)

  • 工業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)勢:在 50L 攪拌式生物反應器中,細胞密度可達 2×10? cells/mL,PRRSV 病毒滴度穩(wěn)定在 10?.? TCID??/mL,單批次病毒產(chǎn)量達 1×1011 TCID??,較傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶工藝提升 10 倍,生產(chǎn)成本降低 40%。該工藝已用于 PRRSV 滅活疫苗的規(guī)模化生產(chǎn),疫苗抗原含量均一性(CV<5%)顯著優(yōu)于貼壁培養(yǎng)。

  • 疫苗質(zhì)量提升:懸浮培養(yǎng)體系可減少血清源性雜質(zhì),疫苗中宿主細胞蛋白殘留量<50ng / 劑,較貼壁工藝降低 60%,過敏反應發(fā)生率下降 30%(臨床試驗數(shù)據(jù))。

  1. 病毒學基礎研究與高通量篩選

  • 病毒復制動力學研究:利用懸浮培養(yǎng)的均一性,可精準測定 PRRSV 在不同階段的復制參數(shù),如潛伏期 6-8 小時、對數(shù)生長期 12-24 小時、穩(wěn)定期 24-48 小時,為優(yōu)化疫苗生產(chǎn)工藝提供數(shù)據(jù)支撐。

  • 抗病du藥物高通量篩選:在 96 孔懸浮培養(yǎng)板中,可同時檢測 200 種以上化合物的抗病毒活性,篩選效率較貼壁培養(yǎng)提升 3 倍。例如,通過該模型篩選出的 PRRSV 3CL 蛋白酶抑制劑,EC??=1.5μM,與動物實驗結(jié)果一致性達 0.92。

  1. 其他病毒培養(yǎng)拓展應用

  • 豬圓環(huán)病毒 2 型(PCV2)培養(yǎng):可支持 PCV2 的低水平復制(滴度 10? TCID??/mL),通過優(yōu)化培養(yǎng)基添加硫酸葡聚糖,滴度提升至 10? TCID??/mL,為 PCV2 與 PRRSV 共感染模型構(gòu)建提供可能。

  • 獸用疫苗載體生產(chǎn):作為重組腺病毒載體的宿主細胞,懸浮培養(yǎng)的病毒載體滴度達 10? PFU/mL,較貼壁培養(yǎng)提升 2 個數(shù)量級,可用于多價疫苗的高效生產(chǎn)。

三、培養(yǎng)與實驗操作要點
  1. 基礎培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:SFM II 無血清培養(yǎng)基(或含 0.5% 血清的 DMEM/F12),添加 4mM L - 谷an酰胺、1μg/mL 重組胰島素,pH 維持在 7.2-7.4,需每日監(jiān)測葡萄糖濃度(維持>2g/L)。

  • 傳代流程:取對數(shù)生長期細胞懸液,1000rpm 離心 5 分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,按初始密度 1×10? cells/mL 接種至搖瓶(轉(zhuǎn)速 100-120rpm),避免細胞團過大(>200μm)導致營養(yǎng)不均。

  • 凍存保護:取密度 2×10? cells/mL 的細胞,加入含 10% DMSO 的凍存液(SFM II 培養(yǎng)基配制),程序降溫后液氮保存,復蘇時 37℃水浴快速解凍,直接接種至預熱的培養(yǎng)基中(無需離心)。

  1. 病毒培養(yǎng)與放大工藝

  • PRRSV 接種:在生物反應器中,當細胞密度達 1.5×10? cells/mL 時,按 MOI=0.01 加入病毒液,維持轉(zhuǎn)速 120rpm,溶氧 50%,感染后 48 小時收獲病毒液,通過中空纖維膜過濾(0.45μm)去除細胞碎片。

  • 補料策略:感染后 24 小時補加 50% 體積的新鮮培養(yǎng)基(含 2× 濃度谷an酰胺),可延長病毒復制期 12 小時,滴度提升 15%-20%。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 規(guī)?;a(chǎn)能力:懸浮培養(yǎng)可通過生物反應器實現(xiàn)大規(guī)模擴增,突破貼壁培養(yǎng)的空間限制,適合工業(yè)化疫苗生產(chǎn)。

  1. 生產(chǎn)效率高:細胞生長速率快、密度高,病毒產(chǎn)量與單位體積產(chǎn)出顯著優(yōu)于貼壁細胞,降低生產(chǎn)成本。

  1. 工藝穩(wěn)定性好:懸浮培養(yǎng)體系均一性高,批間差異<8%,便于質(zhì)量控制與工藝放大。

  • 局限性

  1. 培養(yǎng)基成本高:無血清懸浮培養(yǎng)基價格為傳統(tǒng)培養(yǎng)基的 3-5 倍,增加初期投入成本。

  1. 操作要求高:需掌握懸浮細胞計數(shù)、生物反應器參數(shù)調(diào)控等技術(shù),對操作人員技能要求較高。

  1. 病毒譜較窄:主要適用于 PRRSV 等少數(shù)病毒培養(yǎng),對其他病毒的支持能力有限。

五、研究意義與展望
Marc-145 懸浮適應株的建立推動了 PRRSV 疫苗生產(chǎn)工藝的升級,其規(guī)?;囵B(yǎng)技術(shù)使疫苗產(chǎn)量與質(zhì)量得到雙重提升,為*養(yǎng)豬業(yè) PRRS 防控提供了物質(zhì)保障。在技術(shù)層面,其懸浮適應機制為其他貼壁細胞的馴化提供了參考模式,已成功應用于 Vero、BHK-21 等細胞的懸浮改造。未來,通過基因編輯技術(shù)過表達 PRRSV 受體 CD163,有望進一步提升病毒產(chǎn)量;結(jié)合連續(xù)灌流培養(yǎng)技術(shù),可實現(xiàn)病毒的連續(xù)生產(chǎn),推動獸用疫苗生產(chǎn)向智能化、高效化方向發(fā)展。

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